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1楼2014-03-17 20:32:49

liulongbo358

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2楼: Originally posted by myblin at 2014-03-17 21:45:43
建议你加完H2DCF-DA孵育之后，最好用水洗一下，再进行观察。有时信号会penetration等。因为所有的细胞中都会有ROS，只是量多少的问题。

嗯，谢谢您的回答。我在孵育之后使用负载液进行过三次清洗。开始在显微镜下观察时感觉还挺清晰，但是过段时间观察时就感觉没有那么清晰，视野中到处是淡淡的荧光。之前有怀疑是染料出问题了，之后又新买了sigma的新染料做过后，仍然是这样，不知道问题出在哪里。

3楼2014-03-18 08:52:45

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myblin

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建议你加完H2DCF-DA孵育之后，最好用水洗一下，再进行观察。有时信号会penetration等。因为所有的细胞中都会有ROS，只是量多少的问题。

2楼2014-03-17 21:45:43

liulongbo358

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哦，谢谢您的回答。我是在孵育过后使用负载液清洗的，清洗三次后制片观察。在刚开始置于显微镜下观察时感觉挺清晰的，但是过段时间，也就10几分钟的样子就没有那么清晰了，感觉视野中到处有一层淡淡的荧光。不知是什么原因。之前有怀疑是H2DCF-DA失活了，又重新从sigma新买了染料，但是问题还是一样。这张图还能好一些，其它的对照观察过程中，总是降低的很快，3-10min钟就很快降低了。谢谢您的帮助，还希望大神指点迷津。

4楼2014-03-18 09:01:57

myblin

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4楼: Originally posted by liulongbo358 at 2014-03-18 09:01:57
哦，谢谢您的回答。我是在孵育过后使用负载液清洗的，清洗三次后制片观察。在刚开始置于显微镜下观察时感觉挺清晰的，但是过段时间，也就10几分钟的样子就没有那么清晰了，感觉视野中到处有一层淡淡的荧光。不知是 ...

荧光时间会淬灭的，特别是这种比较敏感的燃料。呵呵呵

5楼2014-03-18 16:29:08