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zx1990

金虫 (小有名气)

[求助] GC-MS测单糖 已有3人参与

求教各位大神，我要测甲烷氧化菌的胞外多糖，实验室之前没有做过，完全自己摸索，请问有没有实验室测过？能否告知具体的前处理方法以及气相条件！求助！！

[ Last edited by 费姚永芬 on 2014-3-13 at 11:58 ]
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1楼 2014-03-13 11:34:03
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zx1990

金虫 (小有名气)
费姚永芬: 记得回来查看您的帖子哦，给应助者金币奖励 2014-03-18 12:02:41
引用回帖:
9楼: Originally posted by wyy080214 at 2014-03-17 20:56:56
多糖可以通过TOF-MS直接检测

关键是没有这种仪器啊，我们学院现有的就是GC-MS，而且据文献报道GC-MS可以测单糖，只是我现在还没有做出来
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10楼2014-03-18 09:43:42
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鸭绿江畔

铁杆木虫 (著名写手)

牛B

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多看看文献吧。
多糖都是先降解成单糖后，再进行衍生化，然后才能进GC分析
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我那么努力，就是为了在更高的层次遇见你！
2楼2014-03-13 13:42:32
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zx1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鸭绿江畔 at 2014-03-13 13:42:32
多看看文献吧。
多糖都是先降解成单糖后，再进行衍生化，然后才能进GC分析

文献看过，前处理方法如下：
1mg冷冻干燥的EPS和50nmol环己六醇（inositol，内置标准）溶解在水解管（hydrolysis tube）中（含有1ml 4M三氟乙酸（），TFA），置于100℃水浴2h。加入10mg硼氢化钠和0.5ml 0.05M NaOH溶液，60℃水浴1h，将中性单糖被还原成糖醇。加入醋酸溶液降解多余的硼氢化钠，直到泡沫消失。用氮气流吹干溶液，并加入1ml甲醇去除硼氢化物，该过程重复4次。剩余物质100℃干燥30min。加入0.5ml吡啶和0.5ml醋酸酐，100℃反应1h。氮气吹脱溶剂，加入1ml蒸馏水溶解剩余物。最后用2ml二氯甲烷来萃取样品，浓缩液加入到GC-MS（(PolarisQ GC/MS, Thermo Finnigan)）中。with a J&W Scientific column (DB 1701, 0.25 mm ID, 30 m).气相条件：初始温度120℃；1min后，以10℃/min的速度升至180℃，保持1min；然后以0.3℃/min升至190℃，保持1min；最后以10℃/min的速度升至210℃.EPS中的中性单糖种类根据保留时间和质谱测出的片段大小确定。每种单糖的量通过样品峰面积与环己六醇峰面积对比得到。

但是进样之后并没有得到目的峰，所以我想知道是不是操作过程有什么严格的要求，比如用到的玻璃器皿需要经过怎样的处理？
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3楼2014-03-14 13:56:10
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鸭绿江畔

铁杆木虫 (著名写手)

牛B
引用回帖:
3楼: Originally posted by zx1990 at 2014-03-14 13:56:10
文献看过，前处理方法如下：
1mg冷冻干燥的EPS和50nmol环己六醇（inositol，内置标准）溶解在水解管（hydrolysis tube）中（含有1ml 4M三氟乙酸（），TFA），置于100℃水浴2h。加入10mg硼氢化钠和0.5ml 0.05M NaO ...

我只能猜是不是水解和衍生化的过程不完全？
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4楼2014-03-14 16:59:21
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