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zx1990

金虫 (小有名气)

[求助] GC-MS测单糖 已有3人参与

求教各位大神,我要测甲烷氧化菌的胞外多糖,实验室之前没有做过,完全自己摸索,请问有没有实验室测过?能否告知具体的前处理方法以及气相条件!求助!!

[ Last edited by 费姚永芬 on 2014-3-13 at 11:58 ]
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

多糖可以通过TOF-MS直接检测
9楼2014-03-17 20:56:56
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查看全部 13 个回答

鸭绿江畔

铁杆木虫 (著名写手)

牛B

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
多看看文献吧。
多糖都是先降解成单糖后,再进行衍生化,然后才能进GC分析
我那么努力,就是为了在更高的层次遇见你!
2楼2014-03-13 13:42:32
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zx1990

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鸭绿江畔 at 2014-03-13 13:42:32
多看看文献吧。
多糖都是先降解成单糖后,再进行衍生化,然后才能进GC分析

文献看过,前处理方法如下:
1mg冷冻干燥的EPS和50nmol环己六醇(inositol,内置标准)溶解在水解管(hydrolysis tube)中(含有1ml 4M三氟乙酸(),TFA),置于100℃水浴2h。加入10mg硼氢化钠和0.5ml 0.05M NaOH溶液,60℃水浴1h,将中性单糖被还原成糖醇。加入醋酸溶液降解多余的硼氢化钠,直到泡沫消失。用氮气流吹干溶液,并加入1ml甲醇去除硼氢化物,该过程重复4次。剩余物质100℃干燥30min。加入0.5ml吡啶和0.5ml醋酸酐,100℃反应1h。氮气吹脱溶剂,加入1ml蒸馏水溶解剩余物。最后用2ml二氯甲烷来萃取样品,浓缩液加入到GC-MS((PolarisQ GC/MS, Thermo Finnigan))中。with a J&W Scientific column (DB 1701, 0.25 mm ID, 30 m).气相条件:初始温度120℃;1min后,以10℃/min的速度升至180℃,保持1min;然后以0.3℃/min升至190℃,保持1min;最后以10℃/min的速度升至210℃.EPS中的中性单糖种类根据保留时间和质谱测出的片段大小确定。每种单糖的量通过样品峰面积与环己六醇峰面积对比得到。

但是进样之后并没有得到目的峰,所以我想知道是不是操作过程有什么严格的要求,比如用到的玻璃器皿需要经过怎样的处理?
3楼2014-03-14 13:56:10
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鸭绿江畔

铁杆木虫 (著名写手)

牛B

引用回帖:
3楼: Originally posted by zx1990 at 2014-03-14 13:56:10
文献看过,前处理方法如下:
1mg冷冻干燥的EPS和50nmol环己六醇(inositol,内置标准)溶解在水解管(hydrolysis tube)中(含有1ml 4M三氟乙酸(),TFA),置于100℃水浴2h。加入10mg硼氢化钠和0.5ml 0.05M NaO ...

我只能猜是不是水解和衍生化的过程不完全?
我那么努力,就是为了在更高的层次遇见你!
4楼2014-03-14 16:59:21
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