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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 为什么我每个条带底部都有一个细条带？
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huangyan0517

金虫 (小有名气)

[交流] 为什么我每个条带底部都有一个细条带？ 已有15人参与

请高手解答一下，为什么我每个条带底部都有一个细条带？
为什么我每个条带底部都有一个细条带？
2014-03-10-6.jpg
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时间在哪里，成就就在哪里
1楼 2014-03-10 15:47:22
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RaIning.oO

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
wizardfan: 金币+5, BioEPI+1, 鼓励做实验来论证观点的做法 2014-04-07 06:12:02
引用回帖:
18楼: Originally posted by huangyan0517 at 2014-03-28 16:30:41
溴酚蓝洗不掉吗？我一直以为溴酚蓝最后脱色时被洗掉了。
...

鉴于溴酚蓝洗不洗得掉的问题问了老师，据说是洗不掉的，理由：考马斯亮蓝染色液是跑完胶以后从外部结合到胶上的的，而溴酚蓝和蛋白是通过跑电泳进入胶内部的，因而洗脱液从外部洗脱先洗脱从胶外结合上的染料，然后再向内洗脱，条带颜色逐渐减弱，而你的胶不仅条带着色很深，且背景未去除完全，是不足以把溴酚蓝洗脱掉的。
另外，由于考虑到洗脱液是否会洗脱到胶内部的问题，以及从楼主的回复来看不打算做验证实验，因而自己又做了一个验证实验，将跑完的胶放在摇床上洗脱一周，最后发现蛋白条带及胶背景洗脱成透明色，而底部仍有蓝色细条带，重新染色后蛋白条带可见，因而推测洗脱液是不能洗脱由电泳跑入胶内的蛋白和溴酚蓝的。
因而证明细条带更有可能是溴酚蓝。
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huangyan0517
21楼2014-04-06 19:59:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yanfan_

新虫 (初入文坛)
★
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应该是溴酚蓝的吧
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5楼2014-03-13 13:30:32
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youlinglyw

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一匡天下

优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉是泡胶的时候压缩的带
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天行健
2楼2014-03-10 19:32:00
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huangyan0517

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by youlinglyw at 2014-03-10 19:32:00
感觉是泡胶的时候压缩的带

溴酚蓝？不应该洗掉了吗
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时间在哪里，成就就在哪里
3楼2014-03-11 14:07:57
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by huangyan0517 at 2014-03-11 14:07:57
溴酚蓝？不应该洗掉了吗...

貌似洗不掉，直接切掉就可以了
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天行健
4楼2014-03-11 14:26:24
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heylixing

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★
silicare: 金币+3, 谢谢参与 2014-03-25 17:30:26
降解条带

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-03-13 13:47:51
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huangyan0517

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by heylixing at 2014-03-13 13:47:51
降解条带

不会吧，买的marker也降解？
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时间在哪里，成就就在哪里
7楼2014-03-14 12:07:03
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一品木乃伊

木虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-03-25 17:30:39
你的胶没跑到头，应该增加电泳的时间，如果是12%或者15%的胶，室温下差不多要再跑最少20分钟左右。
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8楼2014-03-14 21:54:49
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heylixing

铁虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-03-27 09:36:43
引用回帖:
7楼: Originally posted by huangyan0517 at 2014-03-14 12:07:03
不会吧，买的marker也降解？...

你的MARK条带全部跑出来了吗，这条带是一些小分子的蛋白。
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9楼2014-03-16 23:01:06
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woolley

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-03-25 17:31:01
wizardfan: BioEPI-1, 目前来看，做实验论证的结论（21楼）更有说服力 2014-04-07 06:13:47
这些条带是一些小蛋白
你的胶的浓度应该不高，所以超过胶分辨率的小蛋白就会出现在前沿
如果你用8%或10%的胶，前沿的蛋白会更多，这些蛋白由于能够顺利的通过胶的小孔，所以没有分离的效果，都堆在了前沿部分。
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10楼2014-03-17 10:22:34
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