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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 为什么我每个条带底部都有一个细条带？
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樱雪诺风

银虫 (小有名气)
★ ★
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-03-25 17:31:13
应该是小分子量蛋白，没有分离开，跑到一起的。
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11楼2014-03-25 16:19:05
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水红蓝调

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+2, 应助指数+1, 谢谢参与 2014-03-27 09:37:04
胶可以再往下跑跑的，分离胶跑的时间太短，如果只是定性的话还好，如果是测目的蛋白表达量，最下面的那条条带跑胶的时候最好刚跑出去再停
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12楼2014-03-26 22:59:40
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RaIning.oO

铁杆木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个胶好像没跑完，请问染色前那个条带就已经可见了吗，还是染色后才发现都有一个细条带？弱弱的再问一句，应该是考染吧？

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13楼2014-03-27 12:04:09
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huangyan0517

金虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by RaIning.oO at 2014-03-27 12:04:09
这个胶好像没跑完，请问染色前那个条带就已经可见了吗，还是染色后才发现都有一个细条带？弱弱的再问一句，应该是考染吧？

染之前就有，当然是考染。
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时间在哪里，成就就在哪里
14楼2014-03-27 17:22:40
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lu_lu

银虫 (初入文坛)
应该是杂蛋白吧
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15楼2014-03-27 20:38:56
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匿名

用户注销 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+2, 谢谢参与 2014-03-28 13:51:54
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16楼2014-03-27 20:53:57
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RaIning.oO

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
silicare: 金币+5, 辛苦了，欢迎常来生物科学版交流 2014-03-28 13:52:27
silicare: 应助指数+1 2014-03-28 13:52:33
引用回帖:
14楼: Originally posted by huangyan0517 at 2014-03-27 17:22:40
染之前就有，当然是考染。...

猜想是溴酚蓝，一方面，从条带看上的样品不完全一样，而细条带都存在，且位置宽度颜色相近，应该是加入同一物质并量也基本相同，排除人为故意干扰的可能，应该不是杂蛋白污染。其次所采用的染色方法是考染，应该是后染而染色前条带已经在了，而实际上除了MAKER以外，一般蛋白都是染色后观察的，而它有颜色，电泳之前加入的蓝色物质应该也就是溴酚蓝了。此外，溴酚蓝在电泳中起指示作用表现为蓝色，且分子量相对蛋白更小，所以通常跑在蛋白的下方以显示电泳的进度，而这块胶并没有跑完，细条带下方也没有其他条带，因而很有可能是指示剂。
建议：可以留一个空泳道，一个泳道只加loading buffer,一个加mark,加两三种不同样品，并对其中一个样品加不同浓度或量的loading buffer跑两张胶，一张跑一半，一张跑完，对比。如果跑一半的胶出现之前情况，而跑完的胶不出现；空泳道无细条带而其他都有；相同buffer量样品下细条带相同；不同buffer量样品下细条带不完全相同，则证明猜想正确。
本人才疏学浅，妄自猜想，不知分析正确与否，信息了解全面与否，如有疏漏还需海涵之处，还望各位大神指点。如有验证实验真有不符还请告知一起讨论。

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17楼2014-03-28 12:38:11
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huangyan0517

金虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by louis_cheung at 2014-03-27 20:53:57
呃，我曾经头脑一热，跑出了与你类似的条带:正常情况下，marker应该是十条吧？我当时也只跑出了七条，前面有四天压在一起了。后来发现，我跑压缩胶时用了150V,电压太高了，不知道你的是不是由于相同原因引起的~
...

溴酚蓝洗不掉吗？我一直以为溴酚蓝最后脱色时被洗掉了。

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时间在哪里，成就就在哪里
18楼2014-03-28 16:30:41
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yangtao16

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
19楼2014-03-31 16:36:34
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jiangxincsu

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我觉得是你电泳的时间不够，你试试下次把蓝色跑出去，这样应该可以分离完全
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20楼2014-04-01 13:33:07
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