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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 为什么我每个条带底部都有一个细条带？
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RaIning.oO

铁杆木虫 (小有名气)
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wizardfan: 金币+5, BioEPI+1, 鼓励做实验来论证观点的做法 2014-04-07 06:12:02
引用回帖:
18楼: Originally posted by huangyan0517 at 2014-03-28 16:30:41
溴酚蓝洗不掉吗？我一直以为溴酚蓝最后脱色时被洗掉了。
...

鉴于溴酚蓝洗不洗得掉的问题问了老师，据说是洗不掉的，理由：考马斯亮蓝染色液是跑完胶以后从外部结合到胶上的的，而溴酚蓝和蛋白是通过跑电泳进入胶内部的，因而洗脱液从外部洗脱先洗脱从胶外结合上的染料，然后再向内洗脱，条带颜色逐渐减弱，而你的胶不仅条带着色很深，且背景未去除完全，是不足以把溴酚蓝洗脱掉的。
另外，由于考虑到洗脱液是否会洗脱到胶内部的问题，以及从楼主的回复来看不打算做验证实验，因而自己又做了一个验证实验，将跑完的胶放在摇床上洗脱一周，最后发现蛋白条带及胶背景洗脱成透明色，而底部仍有蓝色细条带，重新染色后蛋白条带可见，因而推测洗脱液是不能洗脱由电泳跑入胶内的蛋白和溴酚蓝的。
因而证明细条带更有可能是溴酚蓝。
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huangyan0517
21楼2014-04-06 19:59:46
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huangyan0517

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
21楼: Originally posted by RaIning.oO at 2014-04-06 19:59:46
鉴于溴酚蓝洗不洗得掉的问题问了老师，据说是洗不掉的，理由：考马斯亮蓝染色液是跑完胶以后从外部结合到胶上的的，而溴酚蓝和蛋白是通过跑电泳进入胶内部的，因而洗脱液从外部洗脱先洗脱从胶外结合上的染料，然后 ...

牛

[ 发自小木虫客户端 ]
22楼2014-04-06 22:44:41
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★ ★ ★
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wizardfan: 金币+5, 感谢上图，如果有更进一步的图说明就更好了 2014-04-08 02:42:25
这几张图最早的一张是3年前跑的，有那个条带。但其余的照片都没有那个条带，所以我觉得不是溴酚蓝和考马斯亮蓝结合，而是别的杂质，或者是你买到的溴酚蓝或者其它上样缓冲液里面的成分带入的杂质。

或者还有一个可能，就是你跑胶质量太差，我最早时候不会跑胶就有那个条带，后来就没有了。我经手的NATIVE-PAGE和SDS-PAGE加起来已经超过一千块了。

要是觉得这个条带恶心你，就找找原因，要是觉得无所谓就别分心了，人的精力毕竟有限。
为什么我每个条带底部都有一个细条带？
2011.10.04 10% 6.jpg


为什么我每个条带底部都有一个细条带？-1
2011.12.15 2.2.1MonoQ 15 16 17.png


为什么我每个条带底部都有一个细条带？-2
2011.12.20 主3疏水-强阴9-15.jpg


为什么我每个条带底部都有一个细条带？-3
2012.07.10 WZ99固体培养主2疏水-强阴-割胶-疏水-45、48-51强阴11-17.jpg


为什么我每个条带底部都有一个细条带？-4
2012.07.12 主2疏水-强阴-割胶-疏水1、4-7强阴9-15.jpg


为什么我每个条带底部都有一个细条带？-5
2013.01.22  孤 M WZ99固体培养1.75天重新疏水前+中-强阴-割胶-强阴（2013.01.11）11-17.jpg
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
23楼2014-04-07 13:39:19
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huangyan0517

金虫 (小有名气)
引用回帖:
23楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-04-07 13:39:19
这几张图最早的一张是3年前跑的，有那个条带。但其余的照片都没有那个条带，所以我觉得不是溴酚蓝和考马斯亮蓝结合，而是别的杂质，或者是你买到的溴酚蓝或者其它上样缓冲液里面的成分带入的杂质。

或者还有一个 ...

你第一张图每个泳道底部都有一条带，好像和我的情况差不多，我之前跑电泳也没用底部那条线，新配了溶液之后就这样子了。看条带的分离效果还不错，溶液，操作应该都没问题，实在想不出是哪里出问题了？

[ 发自小木虫客户端 ]
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时间在哪里，成就就在哪里
24楼2014-04-07 18:21:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
我的第一张图分离效果差得很的
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25楼2014-04-07 21:08:32
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Feiyang_X

新虫 (初入文坛)
★
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胶不够长，跑出去啦
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26楼2014-04-08 07:10:10
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sxxuan

金虫 (著名写手)
★
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貌似我也试过，不过没有深究是什么就算了
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你的日子如何，你的力量也必如何！
27楼2014-04-09 21:49:09
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