24小时热门版块排行榜    

查看: 2031  |  回复: 16

白色帝企鹅

新虫 (初入文坛)

[交流] RT反转的时候用的是灭过菌的无菌水,没有用DEPC水,会不会有影响,需要重做吗? 已有13人参与

RT反转的时候用的是灭过菌的无菌水,没有用DEPC水,会不会有影响,需要重做吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yiyi12

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2014-03-31 15:40:56
我们向来都是用灭菌水做RT和溶解RNA的。没问题的~
2楼2014-03-07 16:33:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

唐萌2

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 15:41:03
没问题的,我一直都有的灭菌水
3楼2014-03-07 19:32:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 15:41:09
理论上没事,就怕有RNA污染。再一个RNA酶活性较高高温不容易失活。
hehe
4楼2014-03-07 21:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 15:41:16
那些理论上的东东只能信一小半,若不是建文库之类的重要实验,随便整

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2014-03-07 21:47:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白色帝企鹅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-03-07 21:47:22
那些理论上的东东只能信一小半,若不是建文库之类的重要实验,随便整

我反转之后要构建质粒的,这个算重要实验吗
6楼2014-03-07 21:51:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 15:41:28
引用回帖:
6楼: Originally posted by 白色帝企鹅 at 2014-03-07 21:51:22
我反转之后要构建质粒的,这个算重要实验吗...

很一般的实验啦,反转前RNA酶要是除干净了怎么整都无所谓啦,我提的RNA就是这样。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-03-07 22:02:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yixinyuan

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 15:41:35
实际上只要能确保模板RNA没有被降解,RT反转过程能成功就没有问题,产物是cDNA。
8楼2014-03-07 22:29:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

白色帝企鹅

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yixinyuan at 2014-03-07 22:29:45
实际上只要能确保模板RNA没有被降解,RT反转过程能成功就没有问题,产物是cDNA。

我已经PCR完成,电泳条带大小跟目的基因一致,这算不算是成功了,会不会因为RNA酶的缘故导致突变?
9楼2014-03-07 22:38:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinfeng1985

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
应该不会的。质粒构建后,测序确认下

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
10楼2014-03-08 07:04:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 白色帝企鹅 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见