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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT反转的时候用的是灭过菌的无菌水，没有用DEPC水，会不会有影响，需要重做吗？
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白色帝企鹅

新虫 (初入文坛)

[交流] RT反转的时候用的是灭过菌的无菌水，没有用DEPC水，会不会有影响，需要重做吗？ 已有13人参与

RT反转的时候用的是灭过菌的无菌水，没有用DEPC水，会不会有影响，需要重做吗？
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1楼 2014-03-07 15:49:32
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yiyi12

银虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流经验！ 2014-03-31 15:40:56
我们向来都是用灭菌水做RT和溶解RNA的。没问题的~
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2楼2014-03-07 16:33:58
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唐萌2

新虫 (初入文坛)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 15:41:03
没问题的，我一直都有的灭菌水
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3楼2014-03-07 19:32:51
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 15:41:09
理论上没事，就怕有RNA污染。再一个RNA酶活性较高高温不容易失活。
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hehe
4楼2014-03-07 21:15:16
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Neo2000

木虫 (著名写手)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 15:41:16
那些理论上的东东只能信一小半，若不是建文库之类的重要实验，随便整

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5楼2014-03-07 21:47:22
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白色帝企鹅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-03-07 21:47:22
那些理论上的东东只能信一小半，若不是建文库之类的重要实验，随便整

我反转之后要构建质粒的，这个算重要实验吗
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6楼2014-03-07 21:51:22
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Neo2000

木虫 (著名写手)
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引用回帖:
6楼: Originally posted by 白色帝企鹅 at 2014-03-07 21:51:22
我反转之后要构建质粒的，这个算重要实验吗...

很一般的实验啦，反转前RNA酶要是除干净了怎么整都无所谓啦，我提的RNA就是这样。

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-03-07 22:02:58
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yixinyuan

木虫 (正式写手)
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 15:41:35
实际上只要能确保模板RNA没有被降解，RT反转过程能成功就没有问题，产物是cDNA。
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8楼2014-03-07 22:29:45
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白色帝企鹅

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yixinyuan at 2014-03-07 22:29:45
实际上只要能确保模板RNA没有被降解，RT反转过程能成功就没有问题，产物是cDNA。

我已经PCR完成，电泳条带大小跟目的基因一致，这算不算是成功了，会不会因为RNA酶的缘故导致突变？
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9楼2014-03-07 22:38:21
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jinfeng1985

铁虫 (初入文坛)
★
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应该不会的。质粒构建后，测序确认下

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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10楼2014-03-08 07:04:34
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