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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 重组质粒提取，结果提取片段跑胶 比实际还大，请各位大侠给指点一下
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jjwhl

银虫 (正式写手)

[求助] 重组质粒提取，结果提取片段跑胶 比实际还大，请各位大侠给指点一下 已有6人参与

小虫再做大肠杆菌重组质粒（线性质粒加目的基因共6700左右）提取，结果提取片段跑胶 比10000还大，请各位大侠给指点一下
重组质粒提取，结果提取片段跑胶 比实际还大，请各位大侠给指点一下
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1楼 2014-03-05 16:00:54
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jjwhl

银虫 (正式写手)
这是载体自连接吗？求指导
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2楼2014-03-05 16:04:38
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
你这是跑的质粒？建议单酶切后与原先的载体对比一下。
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3楼2014-03-05 16:10:47
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jjwhl(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 00:55:38
可能是基因组，要是大肠杆菌的基因组肯定比10000大，你能否说明具体点，包括提取的方法......。
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4楼2014-03-05 16:55:41
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jiaoxiayoulu

新虫 (小有名气)
我也觉得应该是载体自连啊！
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5楼2014-03-05 18:16:36
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jjwhl(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 00:55:45
这是很常见的问题，不影响，你可以拿这个提取出来的质粒用你的特异性引物进行PCR验证是否有目的基因插入
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
6楼2014-03-05 18:39:52
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jjwhl(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 00:55:55
你选几个酶切位点酶切再验证一下。差异这么大一定有些问题。
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hehe
7楼2014-03-05 21:10:23
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jjwhl

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by forrestgump at 2014-03-05 16:55:41
可能是基因组，要是大肠杆菌的基因组肯定比10000大，你能否说明具体点，包括提取的方法......。

提取的话 是用的宝生生物的质粒out试剂盒，我要从大肠杆菌中提一个师姐构建好的重组质粒，pET28a5300左右 ,目的片段大约1700左右，提出来的看着远大于10000啊
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8楼2014-03-05 22:45:43
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jjwhl

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiaoxiayoulu at 2014-03-05 18:16:36
我也觉得应该是载体自连啊！

要是自连接的话 怎么操作呢
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9楼2014-03-05 22:46:26
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jjwhl

银虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-05 21:10:23
你选几个酶切位点酶切再验证一下。差异这么大一定有些问题。

前面双酶切了两次 酶切完了 都没条带啊
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10楼2014-03-05 22:47:03
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