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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC分离对酸敏感的多肽
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奋发-言午

银虫 (小有名气)

[求助] HPLC分离对酸敏感的多肽 已有6人参与

分离多肽时流动相一般都会加三氟乙酸。但这次的多肽对酸比较敏感，我决定不在流动相里加酸。

于是测了一下HPLC级乙腈的pH，结果pH大概在3左右，读数不稳定。乙腈应该是碱性的吧？而且纯有机溶剂哪来的氢离子呢？

我试着用甲醇替换乙腈做流动相，同样不加酸。柱压很高，而且没有走出来多肽的峰。
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1楼 2014-02-27 11:14:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

shale1983

铁杆木虫 (正式写手)
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
费姚永芬: 应助指数-1, 这样的回复不算应助哦，期待您更有效的交流，欢迎常来分析版 2014-02-28 08:49:37
楼主，你的问题是什么呢？
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2楼2014-02-27 14:44:50
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anger360

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2014-02-27 16:41:18
pH计测试有机溶剂的pH结果是不可靠的，只能测试水溶液的PH

你的多肽对酸敏感，不知道pH耐受范围是多少，

你用甲醇替换乙腈做流动相梯度是怎么样的，是不是没有洗下来。
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4楼2014-02-27 15:20:34
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普通回帖

奋发-言午

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shale1983 at 2014-02-27 14:44:50
楼主，你的问题是什么呢？

不加酸的乙腈为什么会是酸性呢？
用甲醇替换乙腈做流动相，为什么没走出来多肽的峰？

感谢您的回复！
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3楼2014-02-27 15:04:44
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奋发-言午

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by anger360 at 2014-02-27 15:20:34
pH计测试有机溶剂的pH结果是不可靠的，只能测试水溶液的PH

你的多肽对酸敏感，不知道pH耐受范围是多少，

你用甲醇替换乙腈做流动相梯度是怎么样的，是不是没有洗下来。

梯度是1-91走了30分钟，这个梯度用乙腈在15分钟出风，用甲醇没洗下来啊。ph最好不要低于5
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5楼2014-02-27 15:23:56
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050241310

铁杆木虫 (著名写手)
杂质比较复杂的话，可以看看用缓冲盐或是离子对试剂

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2014-02-27 15:47:19
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knomonk

新虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
7楼2014-02-27 18:16:54
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奋发-言午

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by knomonk at 2014-02-27 18:16:54
对酸敏感的多肽？我所知的绝大部分的多肽序列都是可以用固相合成，然后三氟乙酸切割。一般的肽对酸都是不敏感的，完全可以用酸性流动相分析。当然也可能你的多肽上连接了酸性环境容易掉的小分子。

是啊，做了一些修饰，有什么办法分离呢
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8楼2014-03-02 21:37:09
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wyy080214

实习版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

使用缓冲盐或者其他中性离子对试剂，或者对你的目标物稍作衍生或者修饰，使它耐酸，另外改变分离方法，比如电泳之类的
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9楼2014-03-03 08:44:39
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Greatben

银虫 (小有名气)

研发工程师

【答案】应助回帖

用三乙胺跟磷酸的离子对，调PH到6.5，测看看结果怎么样
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10楼2014-03-17 08:29:00
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