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ELISA 不显色 急急急
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哎。。。ELISA这么难吗？以前的时候，是空白值太高（0.2左右），现在是所有的孔读值都在0.09左右（空白孔也是），这是闹哪样，哪里都检查了，不知道是哪一步错了？？？ 现在我把步骤写下来了，希望高手解救一次吧！！！ 采用间接ELISA检测抗血清效价。 用pH 9.6, 0.15 mol.L-1的碳酸盐缓冲液将纯化的重组蛋白稀释为8、2、0.5μg·mL -1 , 包被酶标板, 每孔100μL, 4℃包被过夜。次日每孔加入100μL 7%的山羊血清封闭液, 37℃封闭2h后, 用PBST洗涤3次。然后每孔加入400、800、1600、3200倍稀释的羊抗血清100μL, 空白对照为兔抗血清稀释液( BSA+PBS) , 37℃孵育1 h后, 同上洗涤3次。再次每孔加入100μL HRP标记的羊抗人IgG, 37℃孵育30 min后, 同上洗涤3次。接下来每孔加入100μL TMB显色液, 37℃避光反应15 min后, 每孔再加入50μL 硫酸终止液。最后, 在酶标仪上测450 nm下的OD值。 现在是用天根的TMB后，不显色（几乎没有蓝色），后来没有办法，用以前的ELISA试剂盒剩下的TMB，就显色，TMB是新的，没有问题，而且我用二抗加TMB后反应蓝色，这应该是TMB和二抗都没有问题吧？ 现在真不知道是哪里的原因了  |
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