应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA 不显色 急急急
81/1返回列表
查看: 2243  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] ELISA 不显色 急急急

哎。。。ELISA这么难吗？以前的时候，是空白值太高（0.2左右），现在是所有的孔读值都在0.09左右（空白孔也是），这是闹哪样，哪里都检查了，不知道是哪一步错了？？？

现在我把步骤写下来了，希望高手解救一次吧！！！

采用间接ELISA检测抗血清效价。
用pH 9.6, 0.15 mol.L-1的碳酸盐缓冲液将纯化的重组蛋白稀释为8、2、0.5μg·mL -1 , 包被酶标板, 每孔100μL, 4℃包被过夜。次日每孔加入100μL 7%的山羊血清封闭液, 37℃封闭2h后, 用PBST洗涤3次。然后每孔加入400、800、1600、3200倍稀释的羊抗血清100μL, 空白对照为兔抗血清稀释液( BSA+PBS) , 37℃孵育1 h后, 同上洗涤3次。再次每孔加入100μL HRP标记的羊抗人IgG, 37℃孵育30 min后, 同上洗涤3次。接下来每孔加入100μL TMB显色液, 37℃避光反应15 min后, 每孔再加入50μL 硫酸终止液。最后, 在酶标仪上测450 nm下的OD值。


现在是用天根的TMB后，不显色（几乎没有蓝色），后来没有办法，用以前的ELISA试剂盒剩下的TMB，就显色，TMB是新的，没有问题，而且我用二抗加TMB后反应蓝色，这应该是TMB和二抗都没有问题吧？

现在真不知道是哪里的原因了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-02-25 20:07:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mali010701

铁虫 (初入文坛)
请问下，你包被的重组蛋白是人源的？如果是人源的，那么你加的二抗是羊抗人，这样测得的结果是不是不准确。间接法的二抗似乎应该和你的待测抗体结合。所以是不是应该选择HRP标记的X抗羊抗体？
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-07 17:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mali010701 at 2014-05-07 17:29:07
请问下，你包被的重组蛋白是人源的？如果是人源的，那么你加的二抗是羊抗人，这样测得的结果是不是不准确。间接法的二抗似乎应该和你的待测抗体结合。所以是不是应该选择HRP标记的X抗羊抗体？

不太理解您的意思，我做的包被的重组蛋白是人源的，待测抗体是lgG类的，二抗是抗lgG的HRP标记的抗体
赞一下 回复此楼
3楼2014-05-08 07:27:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mali010701

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ljj0720 at 2014-05-08 07:27:29
不太理解您的意思，我做的包被的重组蛋白是人源的，待测抗体是lgG类的，二抗是抗lgG的HRP标记的抗体...

您做的是间接法，包被抗原是人源，待测抗体是羊源抗人，那么酶标二抗应该与待测抗体结合而不是包被的抗原，所以应该是其他种属抗羊抗体。因为看了你的叙述我感觉你的抗体种属可能有问题。
      本底太高是不是封闭液有问题。换BSA或者脱脂奶粉可以试一下。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-05-08 14:31:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljj0720

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mali010701 at 2014-05-08 14:31:50
您做的是间接法，包被抗原是人源，待测抗体是羊源抗人，那么酶标二抗应该与待测抗体结合而不是包被的抗原，所以应该是其他种属抗羊抗体。因为看了你的叙述我感觉你的抗体种属可能有问题。
      本底太高是不是封 ...

恩 谢谢 我前面可能叙述有误，待测抗体是人血清中的抗体
赞一下 回复此楼
5楼2014-05-09 09:12:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

daping195

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2014-10-23 15:28:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feiyue122

金虫 (正式写手)
请问，你检测的是人血清中抗什么的抗体呢
赞一下 回复此楼
7楼2015-01-27 10:27:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tripleflop

铁虫 (初入文坛)
楼主你好
最近我在做酶联免疫侧激素时也出现了一样的问题，测定结果中OD值只有0.0几 0.1这样，分析也是没有显色
不知道楼主最后找到原因了吗？
是如何解决的？
赞一下 回复此楼
8楼2015-08-27 09:52:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ljj0720 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +11 kulium 2026-08-21 14/700 2026-08-24 02:12 by 流流伤
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +13 ziyangfang 2026-08-19 16/800 2026-08-22 17:08 by WH3796
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭