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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 用大肠杆菌BL21养蛋白时菌体总是结成块状怎么办！！！
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蝶影拂袖

银虫 (小有名气)

[求助] 用大肠杆菌BL21养蛋白时菌体总是结成块状怎么办！！！ 已有3人参与

用BL21养一个内源蛋白，之前用LB养的时候OD正常，只是表达量不高，还是可以纯化出来；但是现在改用M9养，怎么也摇不起来，菌体都在瓶底结成团，上清很澄清，结成的菌块使劲摇可以摇散。用的M9培养基pH7.0,尝试过增大摇床转速到270~300rpm和用大瓶子摇少量菌液，都没有解决问题，确定不是噬菌体污染，同批的表达其他蛋白的菌很正常~小女纸求各位大神指点！！！
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1楼 2014-02-25 18:17:38
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hq0250

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蝶影拂袖: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢你的帮助~！ 2014-02-27 15:27:26
引用回帖:
3楼: Originally posted by 蝶影拂袖 at 2014-02-26 09:42:59
表达的蛋白等电点7.4，我的培养基pH7.0,不是碱性啊~另外养大肠杆菌也可以加玻璃珠么？怎么加呢？...

培养基带着玻璃珠一起消毒即可。或者选择有挡板的三角瓶摇瓶使用哈
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4楼2014-02-26 15:28:51
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dllchina

木虫 (著名写手)

有机的微生物大神

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-02-26 09:23:24
应该是培养的条件不太合适吧，有没有在瓶子中加入玻璃珠？
表达蛋白是碱性蛋白么？如果是就比较难处理
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2楼2014-02-25 20:48:41
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蝶影拂袖

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dllchina at 2014-02-25 20:48:41
应该是培养的条件不太合适吧，有没有在瓶子中加入玻璃珠？
表达蛋白是碱性蛋白么？如果是就比较难处理

表达的蛋白等电点7.4，我的培养基pH7.0,不是碱性啊~另外养大肠杆菌也可以加玻璃珠么？怎么加呢？
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3楼2014-02-26 09:42:59
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蝶影拂袖

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hq0250 at 2014-02-26 15:28:51
培养基带着玻璃珠一起消毒即可。或者选择有挡板的三角瓶摇瓶使用哈...

好奇怪，出问题的三个蛋白中有两个又正常了，可能是用LB养种子液的时候加入了葡萄糖的缘故吧（我的M9碳源是葡萄糖）~另一个还是没长，再试最后一次！今天接到带挡板的瓶子里了，刚诱导，期待有效果~
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5楼2014-02-27 15:01:43
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