| 查看: 2597 | 回复: 8 | ||
倩女金虫 (正式写手)
|
[求助]
siRNA转染过程中，用10%FBS培养基会影响转染效率吗 已有2人参与
|
|
最近在做细胞的siRNA转染，之前实验室转染过程中都用无血清培养基孵育24h，然后再换10%FBS培养基。因为我的细胞在无血清条件下，状态不好，会缩小，所以没有用无血清培养基，直接采用的是10%FBS，目前出现的问题就是，细胞在24h转染过程中，生长速度比较快，这样的状况会影响到转染效果吗？ 求大牛帮帮忙！ |
回复此楼» 猜你喜欢
食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂
已经有8人回复
-
求调剂
已经有7人回复
-
311（085601）求调剂
已经有4人回复
-
305求调剂
已经有4人回复
-
一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利｜求调剂
已经有7人回复
-
一志愿华理，数一英一285求A区调剂
已经有12人回复
-
289求调剂
已经有11人回复
-
生物学学硕，一志愿湖南大学，初试成绩338
已经有6人回复
-
321求调剂
已经有7人回复
-
343求调剂
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- siRNA转染效率
已经有14人回复
- 为什么THP-1细胞不悬浮呢
已经有9人回复
- 请教siRNA转染的几个问题
已经有11人回复
yipan 
铜虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 16389.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4181
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
2楼2014-02-25 16:44:59
倩女
金虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1915.4
- 散金: 826
- 红花: 8
- 帖子: 338
- 在线: 524小时
- 虫号: 727866
- 注册: 2009-03-21
- 性别: MM
- 专业: 细胞信号转导
3楼2014-02-25 16:48:54
yipan
铜虫 (职业作家)
- BioEPI: 2
- 应助: 214 (大学生)
- 金币: 16389.4
- 散金: 275
- 红花: 6
- 帖子: 4181
- 在线: 195.9小时
- 虫号: 2743878
- 注册: 2013-10-22
- 性别: GG
- 专业: 整合生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
倩女: 金币+3, ★★★很有帮助, 多谢 2014-02-25 17:06:47
倩女: 金币+3, ★★★很有帮助, 多谢 2014-02-25 17:06:47
|
说血清不影响转染效率是不负责任的话。转染是需要一定的细胞密度的对吧，所以我建议还是低浓度的FBS和转染过程中更换几次培养基。 大多数培养基在使用前需要加血清。胎牛血清（FCS）经常用到，便宜一点的有马或牛血清。 通常的，血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物，对不同细胞的生 长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响转染效率。因此在转染前建议先测试出对细胞生长良好的血清批号，转染时用同一批号的血清，并同时做负对照（不加转染试剂及外源DNA）以测试细胞生长是否正常。有些转染技术如脂质体转染在有血清存在情况下 效率很低，因此在转染前要除血清。但有些对此敏感的细胞如原代细胞会受到损伤，甚至死 亡导致转染效率极低。 |
4楼2014-02-25 17:00:11
|
无血清培养基孵育24h 这个太久了吧。 siRNA片段吗？还是shRNA质粒？ 其实和大众的转质粒什么的都差不对，做法也类似的。最好做病毒，但麻烦会有危险。电转要求太苛刻，细胞量啊、质粒量啊，脂质体简单好做。 最初脂质体，做法中很看重无血清的那4-6个小时，然后换完全。 现在技术进步了，有点血清也问题不大，当然无血清的还是会好点。用opti-mem会更好。 主要是看你的要求，稳转的话这个方法不好，还是病毒靠谱，要不筛的麻烦。 瞬转的话还好 我觉得这些都无所谓，自从用了流式后， 只要有标记物，转了的分出来不就行了，效率低多做点，多转点。是会浪费钱，但会很省时间，没必要纠结这个问题，大踏步的向前进吧，时间不等人啊。。。。。。。。。 |
5楼2014-02-25 21:55:05
倩女
金虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1915.4
- 散金: 826
- 红花: 8
- 帖子: 338
- 在线: 524小时
- 虫号: 727866
- 注册: 2009-03-21
- 性别: MM
- 专业: 细胞信号转导
6楼2014-02-26 09:24:38
jurkat.1640
至尊木虫 (文坛精英)
- BioEPI: 2
- 应助: 908 (博后)
- 金币: 17175
- 散金: 1654
- 红花: 121
- 沙发: 41
- 帖子: 14525
- 在线: 2184.9小时
- 虫号: 514340
- 注册: 2008-02-28
- 性别: GG
- 专业: 病毒学
7楼2014-02-26 09:35:32
倩女
金虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1915.4
- 散金: 826
- 红花: 8
- 帖子: 338
- 在线: 524小时
- 虫号: 727866
- 注册: 2009-03-21
- 性别: MM
- 专业: 细胞信号转导
8楼2014-02-26 10:36:52
9楼2018-10-15 10:33:44
