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倩女金虫 (正式写手)
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[求助]
siRNA转染过程中，用10%FBS培养基会影响转染效率吗 已有2人参与
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最近在做细胞的siRNA转染，之前实验室转染过程中都用无血清培养基孵育24h，然后再换10%FBS培养基。因为我的细胞在无血清条件下，状态不好，会缩小，所以没有用无血清培养基，直接采用的是10%FBS，目前出现的问题就是，细胞在24h转染过程中，生长速度比较快，这样的状况会影响到转染效果吗？ 求大牛帮帮忙！ |
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无血清培养基孵育24h 这个太久了吧。 siRNA片段吗？还是shRNA质粒？ 其实和大众的转质粒什么的都差不对，做法也类似的。最好做病毒，但麻烦会有危险。电转要求太苛刻，细胞量啊、质粒量啊，脂质体简单好做。 最初脂质体，做法中很看重无血清的那4-6个小时，然后换完全。 现在技术进步了，有点血清也问题不大，当然无血清的还是会好点。用opti-mem会更好。 主要是看你的要求，稳转的话这个方法不好，还是病毒靠谱，要不筛的麻烦。 瞬转的话还好 我觉得这些都无所谓，自从用了流式后， 只要有标记物，转了的分出来不就行了，效率低多做点，多转点。是会浪费钱，但会很省时间，没必要纠结这个问题，大踏步的向前进吧，时间不等人啊。。。。。。。。。 |
5楼2014-02-25 21:55:05
yipan 
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2楼2014-02-25 16:44:59
倩女
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3楼2014-02-25 16:48:54
yipan
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【答案】应助回帖
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倩女: 金币+3, ★★★很有帮助, 多谢 2014-02-25 17:06:47
倩女: 金币+3, ★★★很有帮助, 多谢 2014-02-25 17:06:47
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说血清不影响转染效率是不负责任的话。转染是需要一定的细胞密度的对吧，所以我建议还是低浓度的FBS和转染过程中更换几次培养基。 大多数培养基在使用前需要加血清。胎牛血清（FCS）经常用到，便宜一点的有马或牛血清。 通常的，血清是一种包含生长因子及其它辅助因子的不确切成分的添加物，对不同细胞的生 长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响转染效率。因此在转染前建议先测试出对细胞生长良好的血清批号，转染时用同一批号的血清，并同时做负对照（不加转染试剂及外源DNA）以测试细胞生长是否正常。有些转染技术如脂质体转染在有血清存在情况下 效率很低，因此在转染前要除血清。但有些对此敏感的细胞如原代细胞会受到损伤，甚至死 亡导致转染效率极低。 |
4楼2014-02-25 17:00:11
