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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 请大侠帮我看看这个荧光定量的结果能用吗？麻烦请指点一哈，先谢谢了。
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莫馨

新虫 (初入文坛)

[求助] 请大侠帮我看看这个荧光定量的结果能用吗？麻烦请指点一哈，先谢谢了。 已有2人参与

1-5为目的基因，6-10为管家基因
请大侠帮我看看这个荧光定量的结果能用吗？麻烦请指点一哈，先谢谢了。
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请大侠帮我看看这个荧光定量的结果能用吗？麻烦请指点一哈，先谢谢了。-1
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请大侠帮我看看这个荧光定量的结果能用吗？麻烦请指点一哈，先谢谢了。-2
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1楼 2014-02-24 19:58:04
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-02-24 21:13:02
....
  从最后一张图没看清那些是Target，哪些是Internal Control，直观感觉有以下问题
  1. 你木有做技术三重复，或是部分做了，部分没做
  2. 有几个Ct值过低，14、17的那几个作为内参或Target都是不合适的，Ct值也要有范围的，20到35前都可以，如果你这个是Target，需要做稀释样品，或稍加cDNA，如果你这个是内参，就需要换一个低表达量内参。
  3. Meltcurve中有几个有多余峰。有几个干脆就是引物二聚体
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Let God do with it as He wills
2楼2014-02-24 20:18:00
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莫馨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-24 20:18:00
....
  从最后一张图没看清那些是Target，哪些是Internal Control，直观感觉有以下问题
  1. 你木有做技术三重复，或是部分做了，部分没做
  2. 有几个Ct值过低，14、17的那几个作为内参或Target都是不合适的，C ...

14和17的是我的内参，我在导数据时把个别偏差远的数据去除了，整个都是做了三重复的。
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3楼2014-02-24 20:35:29
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你最好把每个样品是哪个都标记一下，哪些是对应的内参。只看这些数据只能表明你的荧光定量Ct值。
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hehe
4楼2014-02-24 20:54:28
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有标准品，凑合着用吧。不知道ΔΔCt方法是否需要标准品，但是可以直接比较Ct值。
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5楼2014-02-25 10:32:00
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莫馨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-02-24 20:54:28
你最好把每个样品是哪个都标记一下，哪些是对应的内参。只看这些数据只能表明你的荧光定量Ct值。

在最后一个图里，Rep组中 1，2,3,4,5都是目的基因；5,6,7,8,9,10都是管家基因，采用2ΔΔCt法计算，这些数据可以用吗？
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6楼2014-02-26 22:28:07
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莫馨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 10:32:00
没有标准品，凑合着用吧。不知道ΔΔCt方法是否需要标准品，但是可以直接比较Ct值。

我用的是2ΔΔCt方法，这个好像不需要用标准品，这点不太确定。
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7楼2014-02-26 22:30:20
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莫馨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 10:32:00
没有标准品，凑合着用吧。不知道ΔΔCt方法是否需要标准品，但是可以直接比较Ct值。

这份数据可以吗？
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8楼2014-02-26 22:33:07
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