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5‘Race验证miRNA靶点的原理 已有2人参与
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大家好，近期内急需做验证miRNA靶点的实验，考虑要用RACE，但是首次接触，感觉很多问题想不明白， 头都要涨破了，于是在自己继续摸索的同时，想请有这方面经验的虫友赐教，先表示感谢  1.我研究的物种是一个基因组没测过序的，但有其对应的转录组，这样可否进行实验验证？ 2.如果可以，那么动物miRNA怎么在对应的转录本里找寻相对应的靶标序列（种子序列完全互补？其余序列 允许几个错配？大概需要上下几kb?）？ 3.miRNA应该跟mRNA 3‘UTR结合，那为什么要用5’RACE (主要是扩5‘UTR)，而不是用3’URT？是因为反转录 出来的cDNA跟实际的mRNA是互补的吗？如果是这样，那么特异性引物设计的时候应该是跟mRNA序列一致 的而非反向互补吧。 4.具体试剂盒考虑买Takara的，不知道其效果怎样？大概多久能出结果？ 5.有没有动物中做5‘RACE验证miRNA靶标相关的文献可以推荐？ 这些问题时本人怀着极其虔诚而又焦虑的心情写下的，怕写少了，见这不明所以；写的多了，又觉啰嗦，请亲们不吝赐教吧！ 搬个小板凳在线等~~~  : |
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38楼2016-05-21 09:28:57