查看: 3247  |  回复: 43
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)

[求助] HPLC问题求助高手 已有3人参与

2000年购买的Bio-Rad 公司的Biologic DuoFlow Chromatography System,一直用于分析蛋白质(凝胶色谱及离子交换色谱)。最近3-4年没有人使用了,一直闲置。现在想用于反相HPLC分析,所以新买了C18色谱柱,但还没有连接上C18色谱柱。准备先试验一下系统是否还工作。遇到了麻烦。

流动相A: 0.1% TFA/水;流动相B: 0.1% 乙腈。使用前,2个流动相溶液都分别用超声波清洗器做15分钟脱气处理。

开始试验系统。流动相:A 90%, B 10%,走3分钟;然后A从 90%到0%, B从 10%到100%,走25分钟。

可以看到,没有连接色谱柱的情况下,色谱图出现很多峰,特别是在走梯度的时候。如果单纯走水,没有这些峰。

水占90%的时候,峰也很少。好像是每间隔2分钟,就出1个峰。是气泡峰吗?还是以前管线里面沉积的蛋白残留物?

本人没有操作过HPLC,是新手,身边没有人请教。现请教小木虫上都专家和高手,怎么解决?万分感谢!
HPLC问题求助高手
HPLC-BioLogic DuoFlow.PNG
回复此楼
小木虫-知识宝库的入口。今天,你小木虫了没有?
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
22楼: Originally posted by kf1009 at 2014-02-09 09:08:14
因为你有几年没用,所以你的管路可能较“脏”,你冲洗管路时,可能管路中一些东西污染你的单向阀,导致单向阀不能正常工作,你可以清洗单向阀试一试,不接柱子,用异丙醇做流动相,1.0ml/min,30min,两个泵可以同时 ...

我的检测器是紫外/可见光检测器(QuadTec UV/VIS Detector)。氘灯:190-370 nm; 卤素灯:370-740 nm.

谢谢指导。我马上冲洗,用双泵走甲醇和异丙醇。
小木虫-知识宝库的入口。今天,你小木虫了没有?
23楼2014-02-10 21:23:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 44 个回答

whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
bobcanada(费姚永芬代发): 金币+5, 谢谢交流,欢迎常来分析版,辛苦了 2014-02-11 08:13:53
先看看你的乙腈是不是有问题吧
WorkFinishPublish
2楼2014-02-08 02:04:24
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bobcanada

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
2楼: Originally posted by whynotbest at 2014-02-08 02:04:24
先看看你的乙腈是不是有问题吧

乙腈是EMD公司的HPLC专用乙腈。

产品订购来源:
https://ca.vwr.com/store/catalog ... g_number=CAAX0145-1

产品检验报告:https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf
小木虫-知识宝库的入口。今天,你小木虫了没有?
3楼2014-02-08 02:42:16
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whynotbest

至尊木虫 (职业作家)

淫虫

引用回帖:
3楼: Originally posted by bobcanada at 2014-02-08 02:42:16
乙腈是EMD公司的HPLC专用乙腈。

产品订购来源:
https://ca.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=CAAX0145-1

产品检验报告:https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf...

不管你乙腈是哪里来的 你起码可以一个个排除可能的因素试试
WorkFinishPublish
4楼2014-02-08 02:48:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯,如何抉择 +3 Isak0320 2026-10-12 5/250 2026-10-12 16:42 by Isak0320
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么? +3 好运来~9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了,离AI做有机合成还有多远? +4 wangyl_123 2026-10-10 7/350 2026-10-12 14:47 by chuans0923
[公派出国] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷!
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬,路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些? +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
请填处理意见