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bobcanada至尊木虫 (文坛精英)
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HPLC问题求助高手 已有3人参与
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2000年购买的Bio-Rad 公司的Biologic DuoFlow Chromatography System，一直用于分析蛋白质（凝胶色谱及离子交换色谱）。最近3－4年没有人使用了，一直闲置。现在想用于反相HPLC分析，所以新买了C18色谱柱，但还没有连接上C18色谱柱。准备先试验一下系统是否还工作。遇到了麻烦。 流动相A: 0.1% TFA/水；流动相B: 0.1% 乙腈。使用前，2个流动相溶液都分别用超声波清洗器做15分钟脱气处理。 开始试验系统。流动相：A 90%， B 10%，走3分钟；然后A从 90%到0%， B从 10%到100%，走25分钟。 可以看到，没有连接色谱柱的情况下，色谱图出现很多峰，特别是在走梯度的时候。如果单纯走水，没有这些峰。 水占90%的时候，峰也很少。好像是每间隔2分钟，就出1个峰。是气泡峰吗？还是以前管线里面沉积的蛋白残留物？ 本人没有操作过HPLC，是新手，身边没有人请教。现请教小木虫上都专家和高手，怎么解决？万分感谢！  HPLC-BioLogic DuoFlow.PNG |
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kf1009
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【答案】应助回帖
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费姚永芬: 金币+2, 谢谢交流，欢迎常来分析版 2014-02-11 08:15:42
bobcanada: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-02-14 03:03:36
费姚永芬: 金币+2, 谢谢交流，欢迎常来分析版 2014-02-11 08:15:42
bobcanada: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-02-14 03:03:36
| 因为你有几年没用，所以你的管路可能较“脏”，你冲洗管路时，可能管路中一些东西污染你的单向阀，导致单向阀不能正常工作，你可以清洗单向阀试一试，不接柱子，用异丙醇做流动相，1.0ml/min，30min，两个泵可以同时冲洗。步进电机也不排除有问题，我有一台仪器和你的状态一样，等度没问题，梯度基线和你的状态一样脉冲厉害，后来换了主板上的一个电容就OK了。另，你的检测器是那一种？电导？示差折光？紫外？ |
22楼2014-02-09 09:08:14
whynotbest
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2楼2014-02-08 02:04:24
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乙腈是EMD公司的HPLC专用乙腈。 产品订购来源： https://ca.vwr.com/store/catalog ... g_number=CAAX0145-1 产品检验报告：https://ca.vwr.com/stibo/hi_res/10646475.pdf |
3楼2014-02-08 02:42:16
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4楼2014-02-08 02:48:08
