应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RT-PCR
71/1返回列表
查看: 914  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

970402570

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR 已有2人参与

请问，我想比较一个基因在同一物种，不同状态下的表达量，在做半定量RT-PCR时，怎样才能通过琼脂糖凝胶电泳的亮度分析这个基因的表达量，是不是cDNA的基本浓度须要一致，还是说只要看cDNA跑完电泳后的琼脂糖凝胶电泳图，通过这个亮度来调整cDNA的量？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-01-23 14:51:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyshpy007

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-23 15:22:57
970402570: 金币+7, ★★★很有帮助 2014-01-23 16:42:53
本帖内容被屏蔽
2楼2014-01-23 15:03:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

970402570

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-01-23 15:03:35
RNA浓度尽量保持一致，反转录的cDNA就比较一致了，再看看有没有表达相对稳定的内参，也是排除浓度不一致的有效方法，跑胶只能看大概，做实时定量吧，比较严谨一点
...

你好 请问 如果我用内参检查在2种不同状态下的表达量不同，也就是可能我的cDNA量不同，怎样把模板浓度调成一致？
赞一下 回复此楼
3楼2014-01-23 15:16:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以做个actin的PCR，作为你半定量的内参，cDNA跑胶是弥散的，亮度不好确定
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-01-23 15:23:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

970402570

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-23 15:23:48
你可以做个actin的PCR，作为你半定量的内参，cDNA跑胶是弥散的，亮度不好确定

不好意思 我说的是用内参做完PCR后  这时我想检验一下我的反转录效率，也就是cDNA的质量，可跑电泳条带亮度不一样，这要怎么办？  这是两个不同状态下提取的RNA后反转录的cDNA，我要比较这两种不同状态下这个基因的表达量
赞一下 回复此楼
5楼2014-01-23 16:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
引用回帖:
5楼: Originally posted by 970402570 at 2014-01-23 16:17:14
不好意思 我说的是用内参做完PCR后  这时我想检验一下我的反转录效率，也就是cDNA的质量，可跑电泳条带亮度不一样，这要怎么办？  这是两个不同状态下提取的RNA后反转录的cDNA，我要比较这两种不同状态下这个基因的 ...

那就调加样模板的量，先把actin调齐，再跑目的基因
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2014-01-23 18:05:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyshpy007

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2014-01-24 12:02:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 970402570 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 07:01 by YXM1FDCSE8Bn
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-01 07:01 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 17/850 2026-11-01 06:48 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 21/1050 2026-11-01 06:46 by YXM1FDCSE8Bn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 21/1050 2026-11-01 06:46 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-01 05:48 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 8/400 2026-11-01 05:43 by YXM1FDCSE8Bn
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 05:41 by YXM1FDCSE8Bn
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 05:41 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 15/750 2026-11-01 05:22 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 3/150 2026-11-01 04:04 by YXM1FDCSE8Bn
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 03:59 by YXM1FDCSE8Bn
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 6/300 2026-11-01 03:56 by YXM1FDCSE8Bn
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 10/500 2026-11-01 03:51 by YXM1FDCSE8Bn
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 12/600 2026-11-01 02:19 by YXM1FDCSE8Bn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 4/200 2026-11-01 00:41 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 12/600 2026-11-01 00:15 by YXM1FDCSE8Bn
[硕博家园] 越来越担心硕士毕业后没有竞争力了 +8 zuesli 2026-10-27 14/700 2026-10-30 22:44 by 好运连连公主
[基金申请] 论文的挂名怎么评判贡献？基金申请中，排名第一的挂名文章 +3 biily 2026-10-25 3/150 2026-10-30 18:33 by 旁观2020
[文学芳草园] 闲聊 +3 myrtle 2026-10-25 6/300 2026-10-29 15:28 by myrtle
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭