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970402570

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR 已有2人参与

请问，我想比较一个基因在同一物种，不同状态下的表达量，在做半定量RT-PCR时，怎样才能通过琼脂糖凝胶电泳的亮度分析这个基因的表达量，是不是cDNA的基本浓度须要一致，还是说只要看cDNA跑完电泳后的琼脂糖凝胶电泳图，通过这个亮度来调整cDNA的量？
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1楼 2014-01-23 14:51:42
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-23 15:22:57
970402570: 金币+7, ★★★很有帮助 2014-01-23 16:42:53
本帖内容被屏蔽
2楼2014-01-23 15:03:35
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970402570

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-01-23 15:03:35
RNA浓度尽量保持一致，反转录的cDNA就比较一致了，再看看有没有表达相对稳定的内参，也是排除浓度不一致的有效方法，跑胶只能看大概，做实时定量吧，比较严谨一点
...

你好 请问 如果我用内参检查在2种不同状态下的表达量不同，也就是可能我的cDNA量不同，怎样把模板浓度调成一致？
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3楼2014-01-23 15:16:36
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以做个actin的PCR，作为你半定量的内参，cDNA跑胶是弥散的，亮度不好确定
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-01-23 15:23:48
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970402570

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2014-01-23 15:23:48
你可以做个actin的PCR，作为你半定量的内参，cDNA跑胶是弥散的，亮度不好确定

不好意思 我说的是用内参做完PCR后  这时我想检验一下我的反转录效率，也就是cDNA的质量，可跑电泳条带亮度不一样，这要怎么办？  这是两个不同状态下提取的RNA后反转录的cDNA，我要比较这两种不同状态下这个基因的表达量
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5楼2014-01-23 16:17:14
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gyesang

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引用回帖:
5楼: Originally posted by 970402570 at 2014-01-23 16:17:14
不好意思 我说的是用内参做完PCR后  这时我想检验一下我的反转录效率，也就是cDNA的质量，可跑电泳条带亮度不一样，这要怎么办？  这是两个不同状态下提取的RNA后反转录的cDNA，我要比较这两种不同状态下这个基因的 ...

那就调加样模板的量，先把actin调齐，再跑目的基因
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2014-01-23 18:05:37
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2014-01-24 12:02:48
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