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提纯马血清的IgG
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吹泡泡
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提纯马血清的IgG
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根据网上提供的资料用盐析沉淀(硫酸铵沉淀)法粗提马血清中igg,其中有一步是“ 透析除盐,在常水中透析过夜,再在生理盐水中于4℃透析24h,中间换液数次。”,在常水中透析过夜后,发现透析袋中有沉淀,是不是蛋白变性了,是什么原因呢?捉急,用的是Green Bird 透析袋,截留量是7000
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1楼
2014-01-16 13:09:36
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绿洲王云
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5楼
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Originally posted by
吹泡泡
at 2014-02-13 11:07:41
1.取20ml血清,加生理盐水20ml,再逐滴加入(NH4 )2 SO4 饱和溶液10ml,使成20%(NH4 )2 SO4 溶液,边加边搅拌,充分混合后,静置30min。
2.3 000r/min离心20min,弃去沉淀,以除去纤维蛋白。
3.在上清液中再加 ...
你这做的量有点小,工业生产的话用超滤完全可行。至于你说的沉淀问题,有没有考虑过透析过夜前后液体的温度。如果透析前液体温度高于过夜后温度很多,那么有可能是之前温度较高时溶解的在降温后析出,
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6楼
2014-02-13 12:24:44
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【答案】应助回帖
选用超滤膜应该没问题,igg的分子量大概是多少,我们之前有做过血蛋白的提取浓缩
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2楼
2014-02-07 16:11:51
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2楼
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绿洲王云
at 2014-02-07 16:11:51
选用超滤膜应该没问题,igg的分子量大概是多少,我们之前有做过血蛋白的提取浓缩
应该大于7000,我看帖子上有人说一般都是160kd左右,重链在55kd左右,轻链在25kd左右。我只想粗提下igg,是不是不能再水中透析过夜,而且要用PBS而不是用生理盐水?
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3楼
2014-02-12 14:18:33
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3楼
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吹泡泡
at 2014-02-12 14:18:33
应该大于7000,我看帖子上有人说一般都是160kd左右,重链在55kd左右,轻链在25kd左右。我只想粗提下igg,是不是不能再水中透析过夜,而且要用PBS而不是用生理盐水?...
杂质的分子量呢,如果跟7000相差有点大,用5000-10000的膜超滤就可以了。把你的实验方案给我看看,帮你分析分析。我之前有做过血蛋白的
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4楼
2014-02-12 19:38:26
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