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提纯马血清的IgG 已有1人参与
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| 根据网上提供的资料用盐析沉淀（硫酸铵沉淀）法粗提马血清中igg，其中有一步是“ 透析除盐，在常水中透析过夜，再在生理盐水中于4℃透析24h，中间换液数次。”，在常水中透析过夜后，发现透析袋中有沉淀，是不是蛋白变性了，是什么原因呢？捉急，用的是Green Bird 透析袋，截留量是7000 |
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1．取20ml血清，加生理盐水20ml，再逐滴加入(NH4 )2 SO4 饱和溶液10ml，使成20％(NH4 )2 SO4 溶液，边加边搅拌，充分混合后，静置30min。 2．3 000r/min离心20min，弃去沉淀，以除去纤维蛋白。 3．在上清液中再加(NH4 )2 SO4 饱和溶液30ml，使成50％（(NH4 )2 SO4 溶液，充分混合，静置30min。 4．3 000r/min离心20min，弃上清。 5．于沉淀中加20ml生理盐水，使之溶解，再加(NH4)2SO4饱和溶液10ml，使成33％(NH4 )2 SO4 溶液，充分混合后，静置30min。 6． 3 000r/min离心20min，弃上清，以除去白蛋白。重复步骤5，2-3次。 7． 用10ml生理盐水溶解沉淀，装入透析袋。 8． 透析除盐，在常水中透析过夜，再在生理盐水中于4℃透析24h，中间换液数次。 以1％BaCl2 检查透析液中的SO42-，直至无 SO42-出现为止。也可采用SephadexG25或电透析除盐。 9、离心去沉淀（去除杂蛋白），上清液即为粗提IgG （即γ球蛋白，如以36%的饱和硫酸铵沉淀血清的产物即为优球蛋白，Euglobin，含γ球蛋白）。 |
5楼2014-02-13 11:07:41
6楼2014-02-13 12:24:44