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质粒构建出了奇怪的现象，实在找不到原因，请大家帮忙看看 已有2人参与
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大家好！ 我现在在做Plk0.1-EGF载体重组质粒的构建。有几个问题始终解决不了，找不到原因。 我是载体和目的基因（大小80bp）用EcoRI 和AgeI 37℃过夜双酶切后，跑电泳，胶回收，然后用T4连接。连接产物转化Stbl3感受态. 做了连接的负对照，负对照长了四五个菌落，连接产物大概长十几个菌落，但挑菌抽质粒跑胶后，发现抽出来的质粒比空载体小很多（估计2K左右）。这是什么原因呢？操作什么的应该都没有问题。另外，我们目前用的这个载体是前人改造过的，EcoRI 和AgeI酶切位点之间只有几十bp大小的序列。 我看到 shRNA载体质粒plko.1 mannual，上面说用EcoR I 和Age I分别酶切。并且Age I是先切的，这是为什么，一定要按这顺序切吗？不可以一起双切吗？ [ Last edited by sr_913 on 2014-1-14 at 12:54 ] |
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