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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)

[求助] mtt染色问题 已有1人参与

在做病毒的活性测定，在倒置显微镜先明显看到细胞已经皱缩死亡了，在96孔版中只是没有办法判断是否飘起；但是加上mtt后，也被染上了紫色，而且整块板子上的颜色是相同的，是怎么回事啊，板子是新的
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我是来学习的！！
1楼 2014-01-10 15:53:47
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ixido

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-10 23:18:42
MTT的监测原理是线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原MTT产生紫色的物质，所以楼主看到的细胞皱缩不一定代表细胞线粒体或者细胞内的琥珀酸脱氢酶活性降低或者消失。建议你用一下其他的方法监测细胞的活性和状态。
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2楼2014-01-10 18:11:08
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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ixido at 2014-01-10 18:11:08
MTT的监测原理是线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原MTT产生紫色的物质，所以楼主看到的细胞皱缩不一定代表细胞线粒体或者细胞内的琥珀酸脱氢酶活性降低或者消失。建议你用一下其他的方法监测细胞的活性和状态。

用什么方法比较好呢？能给点建议吗？

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我是来学习的！！
3楼2014-01-10 20:28:44
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ixido

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-10 23:19:18
sophia-yxh: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-01-12 12:54:35
有一些监测细胞周期的试剂盒，还有监测caspase活性的试剂盒，或者用台酚蓝染色后用流式监测都可以尝试一下。
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4楼2014-01-10 22:02:47
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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ixido at 2014-01-10 22:02:47
有一些监测细胞周期的试剂盒，还有监测caspase活性的试剂盒，或者用台酚蓝染色后用流式监测都可以尝试一下。

我现在想起来了，在mtt染色两小时的时候，还没有发黑，但是3h后看得时候板子的底部都变黑了，会不会是血清的问题呀！因为mtt我是直接家进去的，没有把里面的培养基吸掉。

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我是来学习的！！
5楼2014-01-11 09:49:16
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ixido

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by sophia-yxh at 2014-01-11 09:49:16
我现在想起来了，在mtt染色两小时的时候，还没有发黑，但是3h后看得时候板子的底部都变黑了，会不会是血清的问题呀！因为mtt我是直接家进去的，没有把里面的培养基吸掉。
...

我做MTT的时候也没有换液，是可以做出来的。先重复几次看看，做一些正负对照。
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6楼2014-01-11 13:21:15
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sophia-yxh

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by ixido at 2014-01-11 13:21:15
我做MTT的时候也没有换液，是可以做出来的。先重复几次看看，做一些正负对照。...

好的。谢谢啦，还有，在96孔板中死亡的细胞是漂起来了吗？我是做攻毒实验的，明显能看到细胞皱缩，没有了细胞形态，成碎片状的，但就是没有细胞漂浮，但是染色后却和正常组是一样的。而且在镜下能明显看到计量关系的。求解

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7楼2014-01-11 14:33:28
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ixido

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
sophia-yxh: 金币+2, ★★★很有帮助 2014-01-12 17:42:19
引用回帖:
7楼: Originally posted by sophia-yxh at 2014-01-11 14:33:28
好的。谢谢啦，还有，在96孔板中死亡的细胞是漂起来了吗？我是做攻毒实验的，明显能看到细胞皱缩，没有了细胞形态，成碎片状的，但就是没有细胞漂浮，但是染色后却和正常组是一样的。而且在镜下能明显看到计量关系 ...

细胞死亡会有不同的状态，有可能会破碎，有可能只是皱缩。建议换其他的方式进行检测，或者再重复几次。
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8楼2014-01-11 22:27:29
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