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gdh2009095

铜虫 (初入文坛)

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[求助] Hela细胞 96孔板 MTT已有4人参与

各位，我养了半年多的hela细胞，在细胞培养瓶中细胞能正常贴壁，就是里面有很多的小黑点，而且还有少量的死细胞，我一般使用10%FBS+1640进行培养，0.25%EDTA-TYpton消化1-2min,然后加培养基终止，离心5min,分装1:3，然后铺96孔板中后，贴壁24小时后死亡的细胞就会很明显，所以做MTT时，最后的OD值总是上不去，只有对照空只有0.3左右，试了大半年的时间也不可以，麻烦大家帮帮忙，分析一下看是不是我养细胞的过程有哪些问题！跪谢了！
还有就是在养Hela的时候用在1640中加丙酮酸钠吗？是不是不加就不可以？

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1楼2014-01-09 13:24:34

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daibingling

铁虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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我养Hela细胞的时候没有加丙酮酸钠，我觉得你在培养瓶中的细胞状态就不好，然后消化后接孔板死的就特别多。你可以用不加EDTA的胰酶消化，然后在培养的时候加点红霉素（我觉得小黑点应该是黑胶虫），还有接96孔板时，多接点细胞

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2楼2014-01-09 14:38:16

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zs_0716

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

有小黑点的细胞根本不能使用，因为到每孔100ul的环境，细胞非药物致死会很多，根本测不出药物的活性，建议换细胞，一般挽救的效果并不好，如果换后数值仍低，应先暂停实验，观察2-3天细胞状态，应在细胞长势良好且每次换培养基不论颜色如何但很清澈的情况下再进行实验，根据细胞的长势来确定铺板的细胞数，疯长时期有时每孔4000就行，状态一般时我铺过5500

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3楼2014-01-11 11:19:07

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