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langya25

金虫 (正式写手)

[求助] H2O2 1mM 才能抑制细胞增长

我用L02成人肝细胞为对象,使用H2O2做氧化应激,文献报道的H2O2的使用量为100-300 μM,就可以是细胞活力降到50%左右。而我的实验发现,在500 μM 一下的浓度都对细胞活力有促进作用,H2O2浓度达到1000 μM才能使细胞活力降低到50%左右。为什么差异那么大?

使用的培养基中含Hepes,丙酮酸钠,H2O2是刚从sigma买回来的3 wt%,活力检测试剂盒是日本Dojindo的CCK-8,细胞接,96孔板,每孔8000个细胞,培养3天,长到60-70%。

恳请前辈高人指点!
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zhaoyonggang

银虫 (小有名气)


西瓜: 金币+1, 管理交流 2012-04-03 15:10:52
文献也是使用CCK8法吗?培养3天H2O2会不会都分解了?你可以试试ATPGlo,可以在0.5-4小时内检测,避免H2O2分解。
2楼2012-04-03 10:25:22
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langya25

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaoyonggang at 2012-04-03 10:25:22:
文献也是使用CCK8法吗?培养3天H2O2会不会都分解了?你可以试试ATPGlo,可以在0.5-4小时内检测,避免H2O2分解。

我是细胞培养3天后再加H2O2!   

加H2O2后分别作用3h,6h

然后加CCK-8作用1.5h,检测
3楼2012-04-06 13:22:58
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乱世佳人1987

金虫 (小有名气)

个人觉得还是双氧水分解的问题,当双氧水浓度较低时,在体内过氧化氢酶的作用下分解产生氧气,促进细胞生长,但是当浓度过高,超过catalase的分解能力时,就会产生H2O2本身的细胞毒性作用,可能是因为你的培养基的酸碱性问题,H2O2在碱性条件下很易分解,而且37°的培养箱温度估计也会加速H2O2的分解,使原始浓度的双氧水起不到该浓度的作用。
踏实走好每一步!
4楼2012-10-09 11:09:33
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L02
5楼2014-04-13 20:49:48
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