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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » H2O2 1mM 才能抑制细胞增长
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langya25

金虫 (正式写手)

[求助] H2O2 1mM 才能抑制细胞增长

我用L02成人肝细胞为对象，使用H2O2做氧化应激，文献报道的H2O2的使用量为100-300 μM，就可以是细胞活力降到50%左右。而我的实验发现，在500 μM 一下的浓度都对细胞活力有促进作用，H2O2浓度达到1000 μM才能使细胞活力降低到50%左右。为什么差异那么大？

使用的培养基中含Hepes，丙酮酸钠，H2O2是刚从sigma买回来的3 wt%，活力检测试剂盒是日本Dojindo的CCK-8，细胞接,96孔板，每孔8000个细胞，培养3天，长到60-70%。

恳请前辈高人指点！
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1楼 2012-04-02 09:54:48
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langya25

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaoyonggang at 2012-04-03 10:25:22:
文献也是使用CCK8法吗？培养3天H2O2会不会都分解了？你可以试试ATPGlo，可以在0.5-4小时内检测，避免H2O2分解。

我是细胞培养3天后再加H2O2！   

加H2O2后分别作用3h，6h

然后加CCK-8作用1.5h，检测
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3楼2012-04-06 13:22:58
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zhaoyonggang

银虫 (小有名气)
★
西瓜: 金币+1, 管理交流 2012-04-03 15:10:52
文献也是使用CCK8法吗？培养3天H2O2会不会都分解了？你可以试试ATPGlo，可以在0.5-4小时内检测，避免H2O2分解。
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2楼2012-04-03 10:25:22
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乱世佳人1987

金虫 (小有名气)
个人觉得还是双氧水分解的问题，当双氧水浓度较低时，在体内过氧化氢酶的作用下分解产生氧气，促进细胞生长，但是当浓度过高，超过catalase的分解能力时，就会产生H2O2本身的细胞毒性作用，可能是因为你的培养基的酸碱性问题，H2O2在碱性条件下很易分解，而且37°的培养箱温度估计也会加速H2O2的分解，使原始浓度的双氧水起不到该浓度的作用。
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踏实走好每一步！
4楼2012-10-09 11:09:33
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