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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。
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三蛰

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 猫di阁楼 at 2014-02-26 22:23:49
我也是遇到同样的问题，转化后的酵母在抗性板上张得很欢快，可是PCR验证就是不对，我判断是发生了非同源交换，情况和你的很像。
不知道你现在情况如何了？我现在是想多做几次看看能不能成，我的同源部分各有700BP， ...

我现在开始怀疑我的抗性板子是否有效，导致我调取的菌落不一定是阳性的。我在换板子筛选，一个多月了，我都憔悴了，很简单的一个实验我就是搞不定了。。。
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我不会！
11楼2014-02-27 10:49:03
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猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-02-27 10:49:03
我现在开始怀疑我的抗性板子是否有效，导致我调取的菌落不一定是阳性的。我在换板子筛选，一个多月了，我都憔悴了，很简单的一个实验我就是搞不定了。。。...

加油啊..我也和很多同学讨论过抱怨过，不过都做到这一步了，找找原因还是可以做下去的！共勉！
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12楼2014-03-01 23:23:26
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李云飞001

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

lz弄出原因了吗？最近做也是这种情况！
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13楼2014-05-14 14:56:04
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xiaoxiaosu1905

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 三蛰 at 2014-02-27 10:49:03
我现在开始怀疑我的抗性板子是否有效，导致我调取的菌落不一定是阳性的。我在换板子筛选，一个多月了，我都憔悴了，很简单的一个实验我就是搞不定了。。。...

LZ问题解决了吗？我也遇到类似问题，换各种条件各种方法都不行，折腾了快一年了。一直持续不断试。
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14楼2014-10-07 08:49:54
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韩蕾6862

新虫 (初入文坛)
你现在做出来了吗？我也遇到了同样的问题，是怎么回事呢？
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15楼2014-11-28 20:07:35
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小晖晖在复旦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 猫di阁楼 at 2014-02-26 22:23:49
我也是遇到同样的问题，转化后的酵母在抗性板上张得很欢快，可是PCR验证就是不对，我判断是发生了非同源交换，情况和你的很像。
不知道你现在情况如何了？我现在是想多做几次看看能不能成，我的同源部分各有700BP， ...

我现在也遇到你的这个问题，同源部分现在是300，也不成功，你的问题解决了么？跪求指导啊
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16楼2014-12-24 13:46:46
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jackweller

新虫 (初入文坛)
我也遇到了这样的情况，纯化菌后，还是一样PCR出两条带，请问这种问题怎么解决呀
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17楼2015-08-23 23:39:55
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J1663141418

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问解决了吗？PCR验证阳性克隆快要疯掉了
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18楼2019-08-05 20:53:58
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qj1998

禁虫
本帖内容被屏蔽
19楼2024-09-27 20:57:26
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