应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。
52/1返回列表
查看: 4263  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] 酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。 已有4人参与

这是我的PCR验证酵母基因敲除（方法就是常用的同源重组法，醋酸锂转化）泳道1出现的是从pUG6扩增disruption cassette 的一对引物，2-5泳道是A-B，6-9泳道是C-D，10-13泳道是A-D，（其中A、D是目的基因两侧的引物，B、C是目的基因内部的引物，B-M、C-M是marker内部的引物）不过，A、B-M和C-M、D并没有条带，所有样品都是用酵母菌液（冻融处理）作为模版。
我的问题是，我的A-D条带大小说明目的基因还在，且A-B，C-D的条带也说明了这点，但是为什么我的泳道1还有大小与我的disruption cassette 相同的条带呢？而且我今天做了个disruptionF，B-M和C-M，disruptionR两对引物，都有大小与预期相同的条带。说明disruption cassette 已经在酵母细胞中了。。。没有发生同源重组？
各位分析一下什么情况……
酵母基因敲除，PCR验证遇到的问题。
yeast2 编辑.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢
我不会！
1楼 2014-01-07 20:45:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李云飞001

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

lz弄出原因了吗？最近做也是这种情况！
赞一下 回复此楼
13楼2014-05-14 14:56:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

三蛰

铜虫 (小有名气)
不要沉掉……………………
赞一下 回复此楼
我不会！
2楼2014-01-07 23:17:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)
不要沉掉……千万！有做过的望不吝赐教。。。
赞一下 回复此楼
我不会！
3楼2014-01-08 09:52:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spirit87

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-10 23:23:21
三蛰: 金币+2, ★有帮助 2014-01-12 21:47:39
你想过没有酵母也会存在二倍体的问题，如果只敲出了一份基因，而另外一份存在的话就这样。我们经常遇到类似情况
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-10 19:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-03 07:22 by jmr1kibhvw
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qs8kylt1wr 2026-05-01 4/200 2026-05-03 07:19 by jmr1kibhvw
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-03 06:04 by jmr1kibhvw
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-03 05:52 by w5idbsc3mz
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-03 05:07 by jmr1kibhvw
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 05:04 by jmr1kibhvw
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 04:19 by w5idbsc3mz
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:49 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:19 by w5idbsc3mz
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 02:06 by w5idbsc3mz
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k17zww5nna 2026-05-01 5/250 2026-05-03 01:49 by w5idbsc3mz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 01:34 by w5idbsc3mz
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:51 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:36 by zahslv263y
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:21 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-02 14:06 by zahslv263y
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 3/150 2026-05-02 09:36 by dz7y1p1i98
[考博] 药化及相关博士的申请 5+3 中药学渣 2026-04-29 3/150 2026-05-01 18:14 by babero
[有机交流] 一个化合物的合成路线：CAS:367929-02-0 名称：8β-乙烯基雌二醇 50+4 zhquanbing 2026-04-28 4/200 2026-04-30 22:45 by zyqchem
[论文投稿] 有没有快的中文核心比较快录用的，纳米材料光催化 5+3 2914439618 2026-04-27 4/200 2026-04-29 08:59 by 北京莱茵润色
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭