24小时热门版块排行榜    

查看: 1764  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于点突变 已有3人参与

各位大虾,求助如下:
       以各位大虾做点突变的经验,ORF框内除了target site突变,其它位置也有突变,这个一般是什么原因造成的?我用的是Takara的点突变试剂盒,目的片段在T载体上,总长3000多bp,在试剂盒要求的片段长度内。而且发现点突变总是在非target site位置的TTT处少一个T碱基,这是为什么?谢谢啦
回复此楼
没有人生来洒脱,都总是在哭过以后才会感到轻松许多。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luwei13566

木虫 (正式写手)

引用回帖:
16楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2013-12-30 12:50:51
哦,谢谢啦,那用TE buffer一般的PCR,酶切什么的应该都不会有影响吧?什么情况下才会影响后续试验操作呢?...

PCR完一般都有回收的步骤,比如说割胶回收或者纯化,经过纯化后的做酶切一类的绝对没问题,PCR完就酶切的不知道行不行,因为我从来没这样做过~~至少体系里残留的buffer和taq酶,对内切酶绝对会有影响的
大家相互帮助哈
17楼2013-12-30 13:07:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-26 13:03:47
有可能是测序的问题。检查一下测序峰图,重叠部分以测序质量高的为准。非重叠部分也有可能由于质量不高而误读,人工纠正一些程序拼接造成的错误。此外,你多送几个克隆去测序。
2楼2013-12-26 11:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-12-26 13:03:58
其它位置发生突变当然有可能,任何PCR都有可能造成突变。主要是DNA聚合酶错配碱基造成的问题。
3楼2013-12-26 11:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
只要进行PCR就有突变的可能,可以优化一下你的PCR反应,比如稍增加模板的量,降低循环,或者使用试剂盒提供以外的高保真酶做PCR
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-12-26 14:53:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +4 瞬息宇宙 2026-08-10 4/200 2026-08-11 02:02 by 旁观2020
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +3 Tide man 2026-08-10 3/150 2026-08-10 21:48 by GZUZM
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 15/750 2026-08-10 19:29 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +8 documentary 2026-08-10 8/400 2026-08-10 19:20 by loufangrui
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +10 yufeiwaner 2026-08-09 11/550 2026-08-10 18:47 by yufeiwaner
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +14 Lanmanbaby 2026-08-09 22/1100 2026-08-10 14:57 by wwncly
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +11 archvillain 2026-08-04 13/650 2026-08-10 14:41 by seekfind
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
请填处理意见