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ptccc

铜虫 (初入文坛)

[求助] PET-32A重组质粒构建 已有2人参与

最近在重组质粒,遇上很多问题。首先就是我每次抽提质粒的浓度总是很低。然后我那浓度低的质粒双酶切(Ecor1和xho1)后和目的基因连接。挑菌后菌液PCR,条带比较弱,我担心是假阳性,就抽提质粒后用带目的基因的引物做了PCR,条带很亮,大小也对。然后双酶切了,目的基因片段附近有点弱弱的条带,我还不放心,就拿空质粒和我认为的重组质粒跑了胶,一看,重组质粒比较大,而且大小片段应该对。。然后测序。测序结果是空质粒!!!!!!!!!!!我该怎么办?从哪开始重做??
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b6122

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-26 08:29:31
ptccc: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-12-26 22:01:39
你先检查一下是不是菌种悲剧了。划个带抗生素的板子重新挑个菌落做一下,或者重新转化挑菌落。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2013-12-26 00:18:00
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