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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by qhh835 at 2013-12-24 09:47:57
拷贝数低,最好大量抽提质粒,我们提取拷贝数低的质粒一般用威格拉斯大抽试剂盒提取

效果好吗?
21楼2013-12-25 09:40:55
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧

★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流! 2014-03-28 16:41:33
gyesang: 回帖置顶 2014-03-28 16:41:35
引用回帖:
20楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-25 09:39:53
能否把溶液I,II,III和最后的洗脱液如何配置,以及实验操作步骤告知呢?静待回复,感谢。...

就是最普遍的碱法提取
溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8.0),加RNase。
配制方法:1M Tris-HCl(pH 8.0)12.5ml,0.5M EDTA(pH 8.0)10ml,葡萄糖4.730g,加ddH2O至500ml。在121℃高压灭菌15min ,贮存于4℃。
溶液Ⅱ:0.2M NaOH,1% SDS。
配制方法:2M NaOH 1ml,10%SDS 1ml,加ddH2O至10ml。
溶液Ⅲ:醋酸钾(KAc)缓冲液,pH 4.8。
配制方法:5M KAc 300ml,冰醋酸 57.5ml,加ddH2O至500ml。4℃保存备用。
苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)
找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
22楼2013-12-25 10:53:32
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
22楼: Originally posted by txy8469393 at 2013-12-25 10:53:32
就是最普遍的碱法提取
溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8.0),加RNase。
配制方法:1M Tris-HCl(pH 8.0)12.5ml,0.5M EDTA(pH 8.0)10ml,葡萄糖4.730g,加ddH2O至500ml。在121℃高 ...

非常感谢奥
23楼2013-12-26 09:42:00
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艰苦温度

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2013-12-24 04:38:06
质粒提取数量少,只是质粒拷贝数低,裂解的菌液量少或者不充分,柱子回收效率不高的问题!
    有时候按照正规操作提取质粒,也有提不出来的现象是,可能是质粒丢失了-原因不知!
    楼主可以这样:
    1对冻存 ...

最后检测浓度的时候,230的峰突出了,是什么原因你了解吗?怎么才能解决这个问题呢?求赐教。 我提了好多次,可是一直有这个问题,不知道什么原因。。。
24楼2014-01-16 10:30:54
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

引用回帖:
24楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2014-01-16 10:30:54
最后检测浓度的时候,230的峰突出了,是什么原因你了解吗?怎么才能解决这个问题呢?求赐教。 我提了好多次,可是一直有这个问题,不知道什么原因。。。...

230峰值高表明溶液内盐离子浓度较大!
如果使用试剂盒提取的话,建议漂洗的时候适当加大离心力,漂洗两遍后要按照说明再空离心几分钟,可有效降低离子浓度。洗脱可以用自己的双蒸水,也可以启到效果!
如果是自己配置的试剂提取的,沉淀下来的产物需要用70-75%酒精漂洗,目的也是去除盐离子等杂质,然后离心沉淀,然后吸去多余酒精,风干后用超纯水溶解就是了!
特别喜欢家门口开门的瞬间,宝宝那个高兴呀,蹦蹦跳跳,好不热闹!
25楼2014-01-16 10:39:38
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qiaozheng1

木虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-24 09:24:57
感谢,问题已经解决啦...

怎么解决的?
26楼2015-05-12 10:59:47
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)

引用回帖:
26楼: Originally posted by qiaozheng1 at 2015-05-12 10:59:47
怎么解决的?...

同求
27楼2016-03-27 09:11:41
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i羽翼深蓝i

新虫 (正式写手)

请问是怎么解决这个问题额呢?我也碰到了这个问题好难受,做了好多次了
28楼2019-08-12 09:56:03
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雪桐

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-24 09:24:57
感谢,问题已经解决啦...

你好,我也遇到了同样的问题,请问楼主如何解决的啊?
29楼2021-09-24 14:05:27
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雪桐

新虫 (初入文坛)

我目前也遇到了同样的问题,请问楼主最后怎么解决的啊?
30楼2021-09-24 14:12:23
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