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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌质粒提取浓度太低求助
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by qhh835 at 2013-12-24 09:47:57
拷贝数低，最好大量抽提质粒，我们提取拷贝数低的质粒一般用威格拉斯大抽试剂盒提取

效果好吗？
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21楼2013-12-25 09:40:55
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-28 16:41:33
gyesang: 回帖置顶 2014-03-28 16:41:35
引用回帖:
20楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-25 09:39:53
能否把溶液I，II，III和最后的洗脱液如何配置，以及实验操作步骤告知呢？静待回复，感谢。...

就是最普遍的碱法提取
溶液Ⅰ：50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0），加RNase。
配制方法：1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。在121℃高压灭菌15min ，贮存于4℃。
溶液Ⅱ：0.2M NaOH，1% SDS。
配制方法：2M NaOH 1ml，10%SDS 1ml，加ddH2O至10ml。
溶液Ⅲ：醋酸钾（KAc）缓冲液，pH 4.8。
配制方法：5M KAc 300ml，冰醋酸 57.5ml，加ddH2O至500ml。4℃保存备用。
苯酚/氯仿/异戊醇（25：24：1）
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找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
22楼2013-12-25 10:53:32
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by txy8469393 at 2013-12-25 10:53:32
就是最普遍的碱法提取
溶液Ⅰ：50mM葡萄糖，25mM Tris-HCl(pH 8.0)，10mM EDTA(pH 8.0），加RNase。
配制方法：1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml，0.5M EDTA（pH 8.0）10ml，葡萄糖4.730g，加ddH2O至500ml。在121℃高 ...

非常感谢奥
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23楼2013-12-26 09:42:00
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艰苦温度

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2013-12-24 04:38:06
质粒提取数量少，只是质粒拷贝数低，裂解的菌液量少或者不充分，柱子回收效率不高的问题！
    有时候按照正规操作提取质粒，也有提不出来的现象是，可能是质粒丢失了-原因不知！
    楼主可以这样：
    1对冻存 ...

最后检测浓度的时候，230的峰突出了，是什么原因你了解吗？怎么才能解决这个问题呢？求赐教。 我提了好多次，可是一直有这个问题，不知道什么原因。。。
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24楼2014-01-16 10:30:54
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
引用回帖:
24楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2014-01-16 10:30:54
最后检测浓度的时候，230的峰突出了，是什么原因你了解吗？怎么才能解决这个问题呢？求赐教。 我提了好多次，可是一直有这个问题，不知道什么原因。。。...

230峰值高表明溶液内盐离子浓度较大！
如果使用试剂盒提取的话，建议漂洗的时候适当加大离心力，漂洗两遍后要按照说明再空离心几分钟，可有效降低离子浓度。洗脱可以用自己的双蒸水，也可以启到效果！
如果是自己配置的试剂提取的，沉淀下来的产物需要用70-75%酒精漂洗，目的也是去除盐离子等杂质，然后离心沉淀，然后吸去多余酒精，风干后用超纯水溶解就是了！
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
25楼2014-01-16 10:39:38
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qiaozheng1

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-24 09:24:57
感谢，问题已经解决啦...

怎么解决的？
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26楼2015-05-12 10:59:47
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)
引用回帖:
26楼: Originally posted by qiaozheng1 at 2015-05-12 10:59:47
怎么解决的？...

同求
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27楼2016-03-27 09:11:41
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i羽翼深蓝i

新虫 (正式写手)
请问是怎么解决这个问题额呢？我也碰到了这个问题好难受，做了好多次了
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28楼2019-08-12 09:56:03
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雪桐

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-24 09:24:57
感谢，问题已经解决啦...

你好，我也遇到了同样的问题，请问楼主如何解决的啊？
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29楼2021-09-24 14:05:27
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雪桐

新虫 (初入文坛)
我目前也遇到了同样的问题，请问楼主最后怎么解决的啊?
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30楼2021-09-24 14:12:23
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