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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌质粒提取浓度太低求助
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qhh835

金虫 (小有名气)
拷贝数低，最好大量抽提质粒，我们提取拷贝数低的质粒一般用威格拉斯大抽试剂盒提取

[ 发自小木虫客户端 ]
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11楼2013-12-24 09:47:57
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by txy8469393 at 2013-12-24 03:40:24
因为你用了试剂盒

是的，我用天根的，您是怎么做的呢？非常好奇
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12楼2013-12-24 13:54:55
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by sxxuan at 2013-12-24 09:24:07
低拷贝的质粒确实 不是很好提取，所以菌液量一般是加倍的。但是菌液加倍后，相应地溶液I、II、III也应该加倍。也可以是分成两管菌来裂解，离心后上清加入到同一个纯化柱。
其实你的目的只是质粒转化，质粒转化的效 ...

就是只要我提取出来了，不用管浓度高低都可以进行转化实验啦？
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13楼2013-12-24 13:56:15
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhl875891551 at 2013-12-23 16:23:12
天根的效率还不错啊，你试试加大菌液，最后少加些水溶解。。

加大菌量结果提不出来了，可能细菌太多不能全部裂解有关，我想做细菌质粒转化实验，用DH5α，是不是只要提取成功了就可以做啊？
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14楼2013-12-24 13:59:30
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-24 13:56:15
就是只要我提取出来了，不用管浓度高低都可以进行转化实验啦？...

是的，只要有质粒，所以可以试试加1,5,10ul的质粒来分别转化，挑菌看看是否阳性。一般来说质粒转化几乎都是阳性
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你的日子如何，你的力量也必如何！
15楼2013-12-24 14:24:00
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chenwenhua

新虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-28 16:40:43
不要用试剂盒提。人工法提吧，自己配几个溶液I\II\III就可以了，我们这边用人工法能提出500ng/ul的量。
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16楼2013-12-24 15:51:41
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧
引用回帖:
12楼: Originally posted by jsxzzxj at 2013-12-24 13:54:55
是的，我用天根的，您是怎么做的呢？非常好奇...

见15楼，自己配配溶液I，II，III提取就行了。
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找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
17楼2013-12-25 01:52:04
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txy8469393

木虫 (小有名气)

拿着扫把的研究僧
★ ★
gyesang: 金币+2, 有道理！ 2014-03-28 16:40:57
真正专业做分子生物学的实验室是不喜欢用试剂盒提取DNA的，一般喜欢用试剂盒的都是一些以分子生物学为辅助的实验室，因为简单省事，比如做化学的想做点生物啥的。
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找我请打110,你别看我拿着扫把,其实我是弹吉他的!
18楼2013-12-25 01:57:36
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by txy8469393 at 2013-12-25 01:52:04
见15楼，自己配配溶液I，II，III提取就行了。...

能否告知溶液I，II，III溶液的配方？实验操作步骤？感谢
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19楼2013-12-25 09:34:17
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by txy8469393 at 2013-12-25 01:57:36
真正专业做分子生物学的实验室是不喜欢用试剂盒提取DNA的，一般喜欢用试剂盒的都是一些以分子生物学为辅助的实验室，因为简单省事，比如做化学的想做点生物啥的。

能否把溶液I，II，III和最后的洗脱液如何配置，以及实验操作步骤告知呢？静待回复，感谢。
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20楼2013-12-25 09:39:53
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