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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌质粒提取浓度太低求助
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jsxzzxj

铜虫 (初入文坛)

[求助] 细菌质粒提取浓度太低求助 已有8人参与

我质粒提取已经好几次啦，每次提取出来浓度都是很低，我这是低拷贝质粒，想提取出质粒做转化实验，求大侠指导一下并帮我分析一下为什么我提取的质粒跑电泳结果显示浓度太低？
     我曾经加大过菌量可是结果却提不出来，我的操作步骤都是严格按照天根小量中提试剂盒的说明书上来的，求高人指导下奥。
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1楼 2013-12-23 15:01:39
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人
引用回帖:
24楼: Originally posted by 艰苦温度 at 2014-01-16 10:30:54
最后检测浓度的时候，230的峰突出了，是什么原因你了解吗？怎么才能解决这个问题呢？求赐教。 我提了好多次，可是一直有这个问题，不知道什么原因。。。...

230峰值高表明溶液内盐离子浓度较大！
如果使用试剂盒提取的话，建议漂洗的时候适当加大离心力，漂洗两遍后要按照说明再空离心几分钟，可有效降低离子浓度。洗脱可以用自己的双蒸水，也可以启到效果！
如果是自己配置的试剂提取的，沉淀下来的产物需要用70-75%酒精漂洗，目的也是去除盐离子等杂质，然后离心沉淀，然后吸去多余酒精，风干后用超纯水溶解就是了！
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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
25楼2014-01-16 10:39:38
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zhl875891551

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:42
天根的效率还不错啊，你试试加大菌液，最后少加些水溶解。。
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心有多大，舞台就有多大！
2楼2013-12-23 16:23:12
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天猫天猫

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:49
1、采用加富的培养基摇菌，如用超级肉汤培养基或直接将LB培养基中的酵母粉和蛋白胨加倍，仔细调节培养基的初始pH值至中性或微微偏碱性；
2、培养基中添加170ug/ml氯霉素适当抑制菌体的增殖，促进质粒复制；
3、注意培养过程中的通气状态。
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3楼2013-12-23 16:39:51
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-24 08:20:53
多收些菌。裂解时适当增加各溶液的体积，用同一个柱子binding（多上几次）。祝好运
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4楼2013-12-24 02:18:27
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