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season131124铁虫 (小有名气)
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多糖的分步醇沉 已有2人参与
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本人最近想用40%、60%、80%乙醇分步沉淀多糖，看文献中介绍醇沉前多糖溶液浓度最好是2%—5%，我想问一下，如果我的多糖经过脱蛋白后得到的浓缩液，不想冷冻干燥的话，该怎么确定醇沉前的多糖浓度呢？ 一般分步醇沉的操作是不是先将多糖溶液调整到合适浓度后，加入乙醇，使体系中乙醇终浓度是40%，4℃过夜后，抽滤得到多糖沉淀，然后将上清液继续加入乙醇，使体系中乙醇终浓度达到60%，一般怎么计算要加入的乙醇体积呢？在计算的过程中要不要减掉前面加入的乙醇的体积？ 请问一般做分步醇沉的得率怎么样？会不会出现某一个浓度乙醇沉淀的多糖特别多，另一个特别少呢？ 请各位大神赐教，本人将感激不尽~~~~ |
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4楼2013-12-19 16:27:39
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【答案】应助回帖
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1、你可以取少量的浓缩液去做冷冻干燥，不干燥成固体测溶液中多糖的浓度有点麻烦，首先你得摸清楚你的浓缩液稀释到多少倍后用硫酸苯酚法测得的吸光度在0.3~0.7之间，然后再配相应浓度的葡萄糖溶液。 2、你说的就是分步醇沉的方法，测乙醇浓度可以用酒精计，或者自己算，自己算你得先清楚你所用的乙醇的浓度，无水乙醇好算一点，95%的乙醇稍微麻烦些，但都不是问题。料液中乙醇的终浓度 C=加入乙醇前溶液体积V1*加入乙醇前溶液乙醇浓度C1+所加入的乙醇体积V2*所加入的乙醇浓度C2/V1+V2，那按这个公式就能算出你想要的东西。 3、多糖是由不同数量的单糖按不同的序列聚合起来的，分子量分布很广，而分子量与多糖的溶解性密切相关，所以分步醇沉出来的多糖肯定会有多有少，这是很正常的现象。 |
2楼2013-12-19 13:55:17
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20