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lm334723460

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 397.9
散金: 1
帖子: 64
在线: 49.9小时
虫号: 2572878
注册: 2013-07-30
专业: 环境微生物学

[交流] PCR引物已有5人参与

我从文献上找了一对引物，现在要试扩增的程序，退火温度等。我想问下各位是怎么做的。

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1楼 2013-12-18 22:05:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Dr.G

新虫 (初入文坛)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 61.8
帖子: 13
在线: 4.8小时
虫号: 2872883
注册: 2013-12-15
专业: 生物大分子结构与功能

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+5, 鼓励回帖交流！ 2014-01-27 20:51:58

你要“退火温度等”，你是要摸索PCR的最佳实验条件吗？
如果是的话：
1.引物Tm值你知道了吧，你使用的taq酶说明书上有建议的退火温度（不同厂家Taq酶的扩增能力、扩增速度、与模板的亲和能力各有不同，所以同一模板不同厂家的酶PCR的退火温度、延伸时间会有差异），你浏览下所使用的Taq酶说明书建议的退火温度（扩增能力强的Taq酶退火温度为Tm值低1-2度，扩增能力差点的为Tm值低5度等等）
2.TOUCHDOWN摸索退火温度
3.预变性的温度、时间；变性的温度、时间；延伸的温度、时间；这些Taq酶说明书上会有说明，不同牌子的酶会有差异
4.顺便说一句：没有一成不变的退火温度或者延伸时间等等，PCR的条件不仅和引物、模板关系很大，而且与所使用的Taq酶的特点也有很大关系，而很多同学会忽略了所使用的Taq酶的特点