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lm334723460银虫 (小有名气)
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PCR引物 已有5人参与
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| 我从文献上找了一对引物，现在要试扩增的程序，退火温度等。我想问下各位是怎么做的。 |
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2楼2013-12-18 22:46:45
3楼2013-12-19 09:49:22
lm334723460
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4楼2013-12-19 09:51:53
achonghello
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5楼2013-12-19 15:39:37
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你要“退火温度等”，你是要摸索PCR的最佳实验条件吗？ 如果是的话： 1.引物Tm值你知道了吧，你使用的taq酶说明书上有建议的退火温度（不同厂家Taq酶的扩增能力、扩增速度、与模板的亲和能力各有不同，所以同一模板不同厂家的酶PCR的退火温度、延伸时间会有差异），你浏览下所使用的Taq酶说明书建议的退火温度（扩增能力强的Taq酶退火温度为Tm值低1-2度，扩增能力差点的为Tm值低5度 等等） 2.TOUCHDOWN摸索退火温度 3.预变性的温度、时间；变性的温度、时间；延伸的温度、时间；这些Taq酶说明书上会有说明，不同牌子的酶会有差异 4.顺便说一句：没有一成不变的退火温度或者延伸时间等等，PCR的条件不仅和引物、模板关系很大，而且与所使用的Taq酶的特点也有很大关系，而很多同学会忽略了所使用的Taq酶的特点 |
7楼2013-12-19 20:02:36
lm334723460
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9楼2013-12-22 13:22:30
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