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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 微生物、发酵 » 求助抗氧化的问题
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低调的huali

木虫 (正式写手)

[求助] 求助抗氧化的问题 已有2人参与

最近在做抗氧化的实验，各种纠结啊。做的是体外的抗氧化，分别作了DPPH、螯合铁、羟自由基、还原力还有抗脂质氧化
1.亲们在做这些测OD值时候用的紫外分光光度计好还是酶标仪好呀？我看有的文献，试剂添加量都是ul啊
2.我做DPPH时候，计算清除率公式是：(A对照+A空白-A样品)/对照×100  但是我算出的结果竟然全是负值 为什么呀呀？？？
3.我做螯合铁实验时候 计算公式是（1-A样品/A空白）×100  我得出的样品比空白大 也是负值
4.做羟自由基时候 根据公式算出的依旧还是负值  到底是为什么啊啊 神啊 在线等大神求教啊 blabla~~~好捉急
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1楼 2013-12-18 21:31:21
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低调的huali

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 答非所问 at 2013-12-19 08:27:57
很简单取绝对值就可以了，你的公式貌似错了，应该是A样品-A对照-A空白

可以直接取绝对值吗 难道真的是公式问题呀呀呀  我的都是负值啊啊啊
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9楼2013-12-19 21:10:26
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低调的huali

木虫 (正式写手)
DPPH清楚采取的是：500 μL样品与500 μL 99.5%的乙醇和125 μL含有0.02% DPPH的99.5%的乙醇。混合物在黑暗中反应30 min后，在8000 g、4 ℃下离心5 min。取上清液在517 nm的波长下测定吸光值，采用BHT(0.2 mmol/L)作为阳性对照。自由基清除率的
计算方法为：
DPPH自由基清除率(%)=(A对照+A空白-A样品)/A对照
×100
对照组：500 μL去离子水+500 μL 99.5%的乙醇和125 μL含有0.02% DPPH的99.5%的乙醇。
样品组：500 μL待测样品+500 μL 99.5%的乙醇和125 μL含有0.02% DPPH的99.5%的乙醇。
空白组：500 μL待测样品+500 μL 99.5%的乙醇和125 μL 99.5%的乙醇。
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2楼2013-12-18 21:33:16
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低调的huali

木虫 (正式写手)
金属螯合测定 ：800 μL样品、10 μL 2 mmol/L的FeSO4， 20 μL 5 mmol/L的菲洛嗪混合在室温下反应10 min后8000 g、4 ℃离心5min。取上清液在562 nm下测定吸光度。用磷酸缓冲液代替样品作为空白对照，2 mmol/L的EDTA作为标准的金属螯合剂作为阳性对照。
金属螯合率(%)=(1-A样品/A空白)×100
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3楼2013-12-18 21:33:57
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低调的huali

木虫 (正式写手)
清除羟自由基实验
试管中分别加入1mL 0.05mol/L pH 7.4 的磷酸缓冲液，0.5mL 6mmol/L 的邻二氮菲，充分混匀后，加入
0.5mL 6mmol/L 的FeSO4 溶液，立即混匀。然后向其中加入0.5mL 的样品溶液，混匀，再加入0.5mL 0.1% 的
H2O2，最后补充体积到4mL，同时做损伤管和未损伤管，其中，损伤管中加入0.5mL 0.1% 的H2O2，未损伤管不加H2O2，最后均将体积补充到4mL。于37℃保温1h ，测其在536 nm 波长处的吸光度。
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4楼2013-12-18 21:35:27
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