24小时热门版块排行榜    

查看: 1387  |  回复: 17

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

[求助] 包涵体纯化 已有2人参与

由于表达的目的蛋白主要是以包涵体的形式存在,所以想做包涵体纯化。用8M尿素溶解包涵体,用镍柱进行纯化。(标签是His标签)1:包涵体溶解液;2:15mM咪唑洗脱液;3:15mM咪唑洗脱液;4:50mM咪唑洗脱液;5::500mM咪唑洗脱液。箭头处为目的蛋白。感觉目的蛋白大部分没有挂柱子,这是为什么啊?请各位高手帮忙分析一下吧

包涵体纯化
无标题.jpg

[ Last edited by 海之韵-哈哈 on 2013-12-16 at 21:38 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

严以律已,宽以待人
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

同求》》》》
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-17 08:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你把咪唑浓度再降一下试试,还有就是你用了几个His作为标签,太少结合力弱就容易被洗脱,尿素溶解包涵体效果有时候不是很好,你可以试试盐酸胍溶解包涵体,然后上柱子后再把盐酸胍洗掉
3楼2013-12-17 09:30:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

内容已删除
严以律已,宽以待人
4楼2013-12-18 14:59:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 14:59:28
用的是6个His标签。...

你的柱子是新的吗?
5楼2013-12-18 15:11:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-18 15:11:11
你的柱子是新的吗?...

是新的,用的 Ni-NTA His-Bind Resin
严以律已,宽以待人
6楼2013-12-18 17:47:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-18 15:11:11
你的柱子是新的吗?...

买来一直在4度保存的。
严以律已,宽以待人
7楼2013-12-18 17:47:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-17 08:31:21
同求》》》》

你的解决了吗?
严以律已,宽以待人
8楼2013-12-18 20:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-17 09:30:05
你把咪唑浓度再降一下试试,还有就是你用了几个His作为标签,太少结合力弱就容易被洗脱,尿素溶解包涵体效果有时候不是很好,你可以试试盐酸胍溶解包涵体,然后上柱子后再把盐酸胍洗掉

你好,用盐酸胍溶解包涵体一定能使His标签暴露出来吗?这次我用尿素过夜溶解包涵体,没有挂柱。还有就是用多大pH的缓冲液配咪唑比较好啊?咪唑的浓度最低能降到多少啊?第一次做不懂啊,请多指点
严以律已,宽以待人
9楼2013-12-18 20:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 20:10:03
你的解决了吗?

嗯,差不多吧。。。我是用尿素溶解的,一般4度过夜。然后过镍柱纯化,先用10mM咪唑平衡,后直接用500mM咪唑洗脱,经SDS电泳发现了我的目的带。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
10楼2013-12-18 21:15:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 海之韵-哈哈 的主题更新
信息提示
请填处理意见