24小时热门版块排行榜    

查看: 1737  |  回复: 17

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

[求助] 包涵体纯化 已有2人参与

由于表达的目的蛋白主要是以包涵体的形式存在,所以想做包涵体纯化。用8M尿素溶解包涵体,用镍柱进行纯化。(标签是His标签)1:包涵体溶解液;2:15mM咪唑洗脱液;3:15mM咪唑洗脱液;4:50mM咪唑洗脱液;5::500mM咪唑洗脱液。箭头处为目的蛋白。感觉目的蛋白大部分没有挂柱子,这是为什么啊?请各位高手帮忙分析一下吧

包涵体纯化
无标题.jpg

[ Last edited by 海之韵-哈哈 on 2013-12-16 at 21:38 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

严以律已,宽以待人
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

同求》》》》
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2013-12-17 08:31:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你把咪唑浓度再降一下试试,还有就是你用了几个His作为标签,太少结合力弱就容易被洗脱,尿素溶解包涵体效果有时候不是很好,你可以试试盐酸胍溶解包涵体,然后上柱子后再把盐酸胍洗掉
3楼2013-12-17 09:30:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

内容已删除
严以律已,宽以待人
4楼2013-12-18 14:59:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 14:59:28
用的是6个His标签。...

你的柱子是新的吗?
5楼2013-12-18 15:11:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-18 15:11:11
你的柱子是新的吗?...

是新的,用的 Ni-NTA His-Bind Resin
严以律已,宽以待人
6楼2013-12-18 17:47:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-18 15:11:11
你的柱子是新的吗?...

买来一直在4度保存的。
严以律已,宽以待人
7楼2013-12-18 17:47:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-17 08:31:21
同求》》》》

你的解决了吗?
严以律已,宽以待人
8楼2013-12-18 20:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-17 09:30:05
你把咪唑浓度再降一下试试,还有就是你用了几个His作为标签,太少结合力弱就容易被洗脱,尿素溶解包涵体效果有时候不是很好,你可以试试盐酸胍溶解包涵体,然后上柱子后再把盐酸胍洗掉

你好,用盐酸胍溶解包涵体一定能使His标签暴露出来吗?这次我用尿素过夜溶解包涵体,没有挂柱。还有就是用多大pH的缓冲液配咪唑比较好啊?咪唑的浓度最低能降到多少啊?第一次做不懂啊,请多指点
严以律已,宽以待人
9楼2013-12-18 20:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 20:10:03
你的解决了吗?

嗯,差不多吧。。。我是用尿素溶解的,一般4度过夜。然后过镍柱纯化,先用10mM咪唑平衡,后直接用500mM咪唑洗脱,经SDS电泳发现了我的目的带。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
10楼2013-12-18 21:15:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 海之韵-哈哈 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +5 chengyan1220 2026-08-21 5/250 2026-08-21 12:34 by gltch
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +23 yaoyewhu2008 2026-08-20 25/1250 2026-08-21 12:19 by Poppy1104
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 让我中一个面上吧! +10 大萍1987 2026-08-20 12/600 2026-08-21 09:31 by 020100099
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见