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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 包涵体纯化
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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

[求助] 包涵体纯化 已有2人参与

由于表达的目的蛋白主要是以包涵体的形式存在，所以想做包涵体纯化。用8M尿素溶解包涵体，用镍柱进行纯化。（标签是His标签）1：包涵体溶解液；2:15mM咪唑洗脱液；3：15mM咪唑洗脱液；4：50mM咪唑洗脱液；5：:500mM咪唑洗脱液。箭头处为目的蛋白。感觉目的蛋白大部分没有挂柱子，这是为什么啊？请各位高手帮忙分析一下吧

包涵体纯化
无标题.jpg

[ Last edited by 海之韵-哈哈 on 2013-12-16 at 21:38 ]
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严以律已，宽以待人
1楼 2013-12-16 21:28:02
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 14:59:28
用的是6个His标签。...

你的柱子是新的吗？
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5楼2013-12-18 15:11:11
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你把咪唑浓度再降一下试试，还有就是你用了几个His作为标签，太少结合力弱就容易被洗脱，尿素溶解包涵体效果有时候不是很好，你可以试试盐酸胍溶解包涵体，然后上柱子后再把盐酸胍洗掉
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3楼2013-12-17 09:30:05
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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-18 15:11:11
你的柱子是新的吗？...

是新的，用的 Ni-NTA His-Bind Resin
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严以律已，宽以待人
6楼2013-12-18 17:47:14
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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-18 15:11:11
你的柱子是新的吗？...

买来一直在4度保存的。
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严以律已，宽以待人
7楼2013-12-18 17:47:55
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