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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-18 21:15:30
嗯，差不多吧。。。我是用尿素溶解的，一般4度过夜。然后过镍柱纯化，先用10mM咪唑平衡，后直接用500mM咪唑洗脱，经SDS电泳发现了我的目的带。...

你说的用10mM的咪唑平衡时什么意思啊？

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严以律已，宽以待人

11楼2013-12-18 21:33:07

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海之韵-哈哈

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引用回帖:

你用的是多大pH的缓冲液配的咪唑啊？每次洗脱的时候用多少微升咪唑洗脱啊？

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严以律已，宽以待人

12楼2013-12-18 21:34:50

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lpzl

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11楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 21:33:07
你说的用10mM的咪唑平衡时什么意思啊？...

就是用来平衡柱子的。。。。

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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...

13楼2013-12-19 08:31:01

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lpzl

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12楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 21:34:50
你用的是多大pH的缓冲液配的咪唑啊？每次洗脱的时候用多少微升咪唑洗脱啊？

...

PH=8.0的，每次都用10ml洗脱液洗脱

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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...

14楼2013-12-19 08:32:11

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【答案】应助回帖

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9楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 20:19:40
你好，用盐酸胍溶解包涵体一定能使His标签暴露出来吗？这次我用尿素过夜溶解包涵体，没有挂柱。还有就是用多大pH的缓冲液配咪唑比较好啊？咪唑的浓度最低能降到多少啊？第一次做不懂啊，请多指点...

pH一般都是8.0左右，咪唑浓度没有最低要求，能洗下你的目的条带就行

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15楼2013-12-19 09:29:30

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