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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-18 21:15:30
嗯,差不多吧。。。我是用尿素溶解的,一般4度过夜。然后过镍柱纯化,先用10mM咪唑平衡,后直接用500mM咪唑洗脱,经SDS电泳发现了我的目的带。...

你说的用10mM的咪唑平衡时什么意思啊?
严以律已,宽以待人
11楼2013-12-18 21:33:07
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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by lpzl at 2013-12-18 21:15:30
嗯,差不多吧。。。我是用尿素溶解的,一般4度过夜。然后过镍柱纯化,先用10mM咪唑平衡,后直接用500mM咪唑洗脱,经SDS电泳发现了我的目的带。...

你用的是多大pH的缓冲液配的咪唑啊?每次洗脱的时候用多少微升咪唑洗脱啊?
严以律已,宽以待人
12楼2013-12-18 21:34:50
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lpzl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 21:33:07
你说的用10mM的咪唑平衡时什么意思啊?...

就是用来平衡柱子的。。。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
13楼2013-12-19 08:31:01
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
12楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 21:34:50
你用的是多大pH的缓冲液配的咪唑啊?每次洗脱的时候用多少微升咪唑洗脱啊?...

PH=8.0的,每次都用10ml洗脱液洗脱
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
14楼2013-12-19 08:32:11
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 20:19:40
你好,用盐酸胍溶解包涵体一定能使His标签暴露出来吗?这次我用尿素过夜溶解包涵体,没有挂柱。还有就是用多大pH的缓冲液配咪唑比较好啊?咪唑的浓度最低能降到多少啊?第一次做不懂啊,请多指点...

pH一般都是8.0左右,咪唑浓度没有最低要求,能洗下你的目的条带就行
15楼2013-12-19 09:29:30
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 20:19:40
你好,用盐酸胍溶解包涵体一定能使His标签暴露出来吗?这次我用尿素过夜溶解包涵体,没有挂柱。还有就是用多大pH的缓冲液配咪唑比较好啊?咪唑的浓度最低能降到多少啊?第一次做不懂啊,请多指点...

pH一般都是8.0左右,咪唑浓度没有最低要求,能洗下你的目的条带就行
16楼2013-12-19 09:30:04
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zilinweizhu

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 海之韵-哈哈 at 2013-12-18 17:47:14
是新的,用的 Ni-NTA His-Bind Resin...

可以试试再生一下柱子
17楼2013-12-19 09:30:54
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海之韵-哈哈

银虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by zilinweizhu at 2013-12-19 09:30:54
可以试试再生一下柱子...

怎么再生柱子啊?新的也需要再生吗?
严以律已,宽以待人
18楼2013-12-19 11:21:00
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