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测植物蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶时的疑惑？
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Enzyme activities were determined in leaf extracts, because in our view this method provides reliable data on the enzyme activity ratios in vivo. A leaf sample (1–1.5 g) was fixed with liquid nitrogen and ground in a mortar. An extracting medium (8–10 ml) containing 50 mM Hepes–NaOH (pH 7.5), 5 mM MgCl2, 1 mM EDTA, 2.5 mM dithiothreitol, and 0.5% BSA was gradually added during grinding. The homogenate was filtered through eight layers of cheesecloth and centrifuged at 20000 g for 15 min. The supernatant was dialyzed for 3 h against a tenfold volume of the extracting medium diluted 2.5 times (this medium was free of BSA but contained 10 mM 2-mercaptoethanol). After dialysis, the extract was used as an enzyme preparation.All procedures were performed at 4℃. 在提取蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶时，8层纱布过滤作用是什么？要用透析缓冲液透析3h，作用是什么？可不可以省略这两步啊？求大神指点。有更简单的提取和测量方法吗？ |
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3楼2015-10-08 11:25:47