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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 集胞藻6803突变株的纯化问题
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冉兆星

木虫 (小有名气)

[求助] 集胞藻6803突变株的纯化问题 已有1人参与

用氯霉素插入失活目的基因的方法获得集胞藻6803突变株，在平板上继代三、四后发现还有很多细菌长在藻周围，转到液体培养基后发现细菌很多，液体浑浊，无法纯化突变株，同时因为这些细菌的存在还影响藻的生理活性。请问有什么方法可以较大程度去除这些细菌？请不吝指教！谢谢！
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1楼 2013-12-13 11:37:57
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叶鹏林1

新虫 (小有名气)
我将质粒转入6803蓝藻中，在sp（壮观霉素)筛选下，涂板挑单克隆，然后划线，再在液体sp抗性的BG11中培养，反复传带（很少的量)，都能长起来，但是提基因组鉴定都不是。这种情况是继续传带还是怎么办？

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9楼2019-10-20 22:45:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冉兆星: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-15 10:29:15
纯化6803很麻烦。划线，挑单克隆继续划线。
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2楼2013-12-13 15:34:45
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冉兆星

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-13 15:34:45
纯化6803很麻烦。划线，挑单克隆继续划线。

如果加大氯霉素的用量会有效果吗？听说相对于kana插入突变而言，氯霉素插入突变不容易纯化。
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3楼2013-12-14 10:19:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冉兆星 at 2013-12-14 10:19:43
如果加大氯霉素的用量会有效果吗？听说相对于kana插入突变而言，氯霉素插入突变不容易纯化。...

如果你本身用氯霉素抗性平板了，说明这些菌也是有氯霉素抗性的，而且细菌的氯霉素耐受性比蓝藻强，所以我觉得用处不大。慢慢划线纯化，通常需要花两三个月。问一下你的野生6803藻种纯吗？通常做个转化不至于污染的，我怀疑你的野生藻有问题。如果野生藻没有问题，可以试试重新转化。
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4楼2013-12-14 11:11:40
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