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冉兆星

木虫 (小有名气)

[求助] 集胞藻6803突变株的纯化问题 已有1人参与

用氯霉素插入失活目的基因的方法获得集胞藻6803突变株,在平板上继代三、四后发现还有很多细菌长在藻周围,转到液体培养基后发现细菌很多,液体浑浊,无法纯化突变株,同时因为这些细菌的存在还影响藻的生理活性。请问有什么方法可以较大程度去除这些细菌?请不吝指教!谢谢!
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冉兆星

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-13 15:34:45
纯化6803很麻烦。划线,挑单克隆继续划线。

如果加大氯霉素的用量会有效果吗?听说相对于kana插入突变而言,氯霉素插入突变不容易纯化。
3楼2013-12-14 10:19:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
冉兆星: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-15 10:29:15
纯化6803很麻烦。划线,挑单克隆继续划线。
2楼2013-12-13 15:34:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 冉兆星 at 2013-12-14 10:19:43
如果加大氯霉素的用量会有效果吗?听说相对于kana插入突变而言,氯霉素插入突变不容易纯化。...

如果你本身用氯霉素抗性平板了,说明这些菌也是有氯霉素抗性的,而且细菌的氯霉素耐受性比蓝藻强,所以我觉得用处不大。慢慢划线纯化,通常需要花两三个月。问一下你的野生6803藻种纯吗?通常做个转化不至于污染的,我怀疑你的野生藻有问题。如果野生藻没有问题,可以试试重新转化。
4楼2013-12-14 11:11:40
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冉兆星

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-14 11:11:40
如果你本身用氯霉素抗性平板了,说明这些菌也是有氯霉素抗性的,而且细菌的氯霉素耐受性比蓝藻强,所以我觉得用处不大。慢慢划线纯化,通常需要花两三个月。问一下你的野生6803藻种纯吗?通常做个转化不至于污染的 ...

野生藻进行转化实验后涂板生长一周时间后,在平板(含氯霉素)上出现菌斑,菌斑不大,但数量不少。
5楼2013-12-14 14:05:50
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