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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 集胞藻6803突变株的纯化问题
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冉兆星

木虫 (小有名气)

[求助] 集胞藻6803突变株的纯化问题 已有1人参与

用氯霉素插入失活目的基因的方法获得集胞藻6803突变株，在平板上继代三、四后发现还有很多细菌长在藻周围，转到液体培养基后发现细菌很多，液体浑浊，无法纯化突变株，同时因为这些细菌的存在还影响藻的生理活性。请问有什么方法可以较大程度去除这些细菌？请不吝指教！谢谢！
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1楼 2013-12-13 11:37:57
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
冉兆星: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-12-15 10:29:15
纯化6803很麻烦。划线，挑单克隆继续划线。
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2楼2013-12-13 15:34:45
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冉兆星

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-13 15:34:45
纯化6803很麻烦。划线，挑单克隆继续划线。

如果加大氯霉素的用量会有效果吗？听说相对于kana插入突变而言，氯霉素插入突变不容易纯化。
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3楼2013-12-14 10:19:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冉兆星 at 2013-12-14 10:19:43
如果加大氯霉素的用量会有效果吗？听说相对于kana插入突变而言，氯霉素插入突变不容易纯化。...

如果你本身用氯霉素抗性平板了，说明这些菌也是有氯霉素抗性的，而且细菌的氯霉素耐受性比蓝藻强，所以我觉得用处不大。慢慢划线纯化，通常需要花两三个月。问一下你的野生6803藻种纯吗？通常做个转化不至于污染的，我怀疑你的野生藻有问题。如果野生藻没有问题，可以试试重新转化。
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4楼2013-12-14 11:11:40
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冉兆星

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-14 11:11:40
如果你本身用氯霉素抗性平板了，说明这些菌也是有氯霉素抗性的，而且细菌的氯霉素耐受性比蓝藻强，所以我觉得用处不大。慢慢划线纯化，通常需要花两三个月。问一下你的野生6803藻种纯吗？通常做个转化不至于污染的 ...

野生藻进行转化实验后涂板生长一周时间后，在平板（含氯霉素）上出现菌斑，菌斑不大，但数量不少。
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5楼2013-12-14 14:05:50
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 冉兆星 at 2013-12-14 14:05:50
野生藻进行转化实验后涂板生长一周时间后，在平板（含氯霉素）上出现菌斑，菌斑不大，但数量不少。...

我是问下你的野生藻是否有菌。如果没有菌的话说明是你转化时引入的，要么从污染的突变株纯化，要么可以重新转化野生藻。
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6楼2013-12-14 14:54:56
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冉兆星

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-14 14:54:56
我是问下你的野生藻是否有菌。如果没有菌的话说明是你转化时引入的，要么从污染的突变株纯化，要么可以重新转化野生藻。...

有菌！这样的话就要重新转化野生藻。我现在需要做是先把野生藻纯化了，然后转化，是这样吧？
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7楼2013-12-15 08:57:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 冉兆星 at 2013-12-15 08:57:59
有菌！这样的话就要重新转化野生藻。我现在需要做是先把野生藻纯化了，然后转化，是这样吧？...

是的。如果野生藻不纯就很麻烦了。不过，你可以同时纯化野生藻和突变株，省些时间。
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8楼2013-12-15 09:09:15
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叶鹏林1

新虫 (小有名气)
我将质粒转入6803蓝藻中，在sp（壮观霉素)筛选下，涂板挑单克隆，然后划线，再在液体sp抗性的BG11中培养，反复传带（很少的量)，都能长起来，但是提基因组鉴定都不是。这种情况是继续传带还是怎么办？

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9楼2019-10-20 22:45:38
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叶鹏林1

新虫 (小有名气)
楼主我也遇到类似的情况

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10楼2019-10-20 22:46:01
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