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文飞778899

银虫 (小有名气)

[求助] 引物

在一个PCR反应体系中,有多条正反引物,稀释引物时把他们稀释在同一管中,使用时直接从一管中取适量用于PCR扩增。想请问大神们,把多条引物稀释在同一管中对PCR扩增有影响吗,是不是很容易形成引物二聚体!??!谢谢指教~~~!!!
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gyesang

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【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-10 14:57:19
文飞778899: 金币+3, 有帮助 2013-12-11 21:17:27
你做的是multiple PCR,如果想做multiple PCR,在引物设计的时候就要统筹兼顾的,现在既然你已经设计好了,那你就混一起跑个电泳试试呗,建议稀释引物的时候,还是单独稀释比较好,实在常用,可以取少量做mix

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2楼2013-12-09 18:16:22
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文飞778899

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 18:16:22
你做的是multiple PCR,如果想做multiple PCR,在引物设计的时候就要统筹兼顾的,现在既然你已经设计好了,那你就混一起跑个电泳试试呗,建议稀释引物的时候,还是单独稀释比较好,实在常用,可以取少量做mix

我是先把各自单引物稀释到100uM,,然后再各取适量所有左右引物混合到一管中,配体系时就直接从单一管中移取。但是现在跑电泳都没条带,会不会是引物都聚集了啊
3楼2013-12-09 23:15:08
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 文飞778899 at 2013-12-09 23:15:08
我是先把各自单引物稀释到100uM,,然后再各取适量所有左右引物混合到一管中,配体系时就直接从单一管中移取。但是现在跑电泳都没条带,会不会是引物都聚集了啊...

用的什么酶做的PCR,什么模板?
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-12-09 23:36:12
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文飞778899

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 23:36:12
用的什么酶做的PCR,什么模板?...

Takara taq酶,真菌粗提DNA。我今天把100um的引物母液取2ul跑电泳,没有任何条带,难道引物有问题,十月份刚合成的啊
5楼2013-12-10 14:25:36
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 文飞778899 at 2013-12-10 14:25:36
Takara taq酶,真菌粗提DNA。我今天把100um的引物母液取2ul跑电泳,没有任何条带,难道引物有问题,十月份刚合成的啊...

提取的基因组DNA是否有检测过?有没有用其他引物测试过?
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6楼2013-12-10 15:02:11
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猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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文飞778899: 金币+2, 有帮助 2013-12-11 21:15:54
没有条带有很多种可能哦
引物最好还是不要先混装在一起,还有100UM的引物浓度是不是有点大啊?我们好像是用10UM的。
你使用混合的引物P没有条带么?有没有分开加试试看?
7楼2013-12-10 21:06:03
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文飞778899

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 23:36:12
用的什么酶做的PCR,什么模板?...

模板是粗提真菌DNA,酶是takara taq酶。我想问下1.8kb片段,40个循环用什么酶效果比较好,谢谢
8楼2013-12-11 21:20:17
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