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文飞778899

银虫 (小有名气)

[求助] 引物

在一个PCR反应体系中，有多条正反引物，稀释引物时把他们稀释在同一管中，使用时直接从一管中取适量用于PCR扩增。想请问大神们，把多条引物稀释在同一管中对PCR扩增有影响吗，是不是很容易形成引物二聚体！??!谢谢指教～～～！！！
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1楼 2013-12-09 18:14:12
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gyesang

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-10 14:57:19
文飞778899: 金币+3, ★有帮助 2013-12-11 21:17:27
你做的是multiple PCR，如果想做multiple PCR，在引物设计的时候就要统筹兼顾的，现在既然你已经设计好了，那你就混一起跑个电泳试试呗，建议稀释引物的时候，还是单独稀释比较好，实在常用，可以取少量做mix
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文飞778899
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2楼2013-12-09 18:16:22
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文飞778899

银虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 18:16:22
你做的是multiple PCR，如果想做multiple PCR，在引物设计的时候就要统筹兼顾的，现在既然你已经设计好了，那你就混一起跑个电泳试试呗，建议稀释引物的时候，还是单独稀释比较好，实在常用，可以取少量做mix

我是先把各自单引物稀释到100uM,，然后再各取适量所有左右引物混合到一管中，配体系时就直接从单一管中移取。但是现在跑电泳都没条带，会不会是引物都聚集了啊
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3楼2013-12-09 23:15:08
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 文飞778899 at 2013-12-09 23:15:08
我是先把各自单引物稀释到100uM,，然后再各取适量所有左右引物混合到一管中，配体系时就直接从单一管中移取。但是现在跑电泳都没条带，会不会是引物都聚集了啊...

用的什么酶做的PCR，什么模板？
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4楼2013-12-09 23:36:12
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文飞778899

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 23:36:12
用的什么酶做的PCR，什么模板？...

Takara taq酶，真菌粗提DNA。我今天把100um的引物母液取2ul跑电泳，没有任何条带，难道引物有问题，十月份刚合成的啊
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5楼2013-12-10 14:25:36
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gyesang

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【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 文飞778899 at 2013-12-10 14:25:36
Takara taq酶，真菌粗提DNA。我今天把100um的引物母液取2ul跑电泳，没有任何条带，难道引物有问题，十月份刚合成的啊...

提取的基因组DNA是否有检测过？有没有用其他引物测试过？
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6楼2013-12-10 15:02:11
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猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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文飞778899: 金币+2, ★有帮助 2013-12-11 21:15:54
没有条带有很多种可能哦
引物最好还是不要先混装在一起，还有100UM的引物浓度是不是有点大啊？我们好像是用10UM的。
你使用混合的引物P没有条带么？有没有分开加试试看？
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7楼2013-12-10 21:06:03
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文飞778899

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 23:36:12
用的什么酶做的PCR，什么模板？...

模板是粗提真菌DNA，酶是takara taq酶。我想问下1.8kb片段，40个循环用什么酶效果比较好，谢谢
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8楼2013-12-11 21:20:17
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