应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 引物
81/1返回列表
查看: 1519  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

文飞778899

银虫 (小有名气)

[求助] 引物

在一个PCR反应体系中，有多条正反引物，稀释引物时把他们稀释在同一管中，使用时直接从一管中取适量用于PCR扩增。想请问大神们，把多条引物稀释在同一管中对PCR扩增有影响吗，是不是很容易形成引物二聚体！??!谢谢指教～～～！！！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-12-09 18:14:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-10 14:57:19
文飞778899: 金币+3, ★有帮助 2013-12-11 21:17:27
你做的是multiple PCR，如果想做multiple PCR，在引物设计的时候就要统筹兼顾的，现在既然你已经设计好了，那你就混一起跑个电泳试试呗，建议稀释引物的时候，还是单独稀释比较好，实在常用，可以取少量做mix
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

文飞778899
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-12-09 18:16:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

文飞778899

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 18:16:22
你做的是multiple PCR，如果想做multiple PCR，在引物设计的时候就要统筹兼顾的，现在既然你已经设计好了，那你就混一起跑个电泳试试呗，建议稀释引物的时候，还是单独稀释比较好，实在常用，可以取少量做mix

我是先把各自单引物稀释到100uM,，然后再各取适量所有左右引物混合到一管中，配体系时就直接从单一管中移取。但是现在跑电泳都没条带，会不会是引物都聚集了啊
赞一下 回复此楼
3楼2013-12-09 23:15:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 文飞778899 at 2013-12-09 23:15:08
我是先把各自单引物稀释到100uM,，然后再各取适量所有左右引物混合到一管中，配体系时就直接从单一管中移取。但是现在跑电泳都没条带，会不会是引物都聚集了啊...

用的什么酶做的PCR，什么模板？
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-12-09 23:36:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

文飞778899

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 23:36:12
用的什么酶做的PCR，什么模板？...

Takara taq酶，真菌粗提DNA。我今天把100um的引物母液取2ul跑电泳，没有任何条带，难道引物有问题，十月份刚合成的啊
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-10 14:25:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 文飞778899 at 2013-12-10 14:25:36
Takara taq酶，真菌粗提DNA。我今天把100um的引物母液取2ul跑电泳，没有任何条带，难道引物有问题，十月份刚合成的啊...

提取的基因组DNA是否有检测过？有没有用其他引物测试过？
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
6楼2013-12-10 15:02:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猫di阁楼

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
文飞778899: 金币+2, ★有帮助 2013-12-11 21:15:54
没有条带有很多种可能哦
引物最好还是不要先混装在一起，还有100UM的引物浓度是不是有点大啊？我们好像是用10UM的。
你使用混合的引物P没有条带么？有没有分开加试试看？
赞一下 回复此楼
7楼2013-12-10 21:06:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

文飞778899

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-09 23:36:12
用的什么酶做的PCR，什么模板？...

模板是粗提真菌DNA，酶是takara taq酶。我想问下1.8kb片段，40个循环用什么酶效果比较好，谢谢
赞一下 回复此楼
8楼2013-12-11 21:20:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 文飞778899 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 21:35 by 4qO8zhfjr2AX
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:33 by 4qO8zhfjr2AX
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-29 21:22 by 4qO8zhfjr2AX
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-29 21:11 by 4qO8zhfjr2AX
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-29 18:26 by 4FFAWE8HcgUD
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 14:13 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:29 by jCd0dEvKHShX
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭