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文飞778899
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引物
在一个PCR反应体系中,有多条正反引物,稀释引物时把他们稀释在同一管中,使用时直接从一管中取适量用于PCR扩增。想请问大神们,把多条引物稀释在同一管中对PCR扩增有影响吗,是不是很容易形成引物二聚体!??!谢谢指教~~~!!!
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2013-12-09 18:14:12
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gyesang
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3楼
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Originally posted by
文飞778899
at 2013-12-09 23:15:08
我是先把各自单引物稀释到100uM,,然后再各取适量所有左右引物混合到一管中,配体系时就直接从单一管中移取。但是现在跑电泳都没条带,会不会是引物都聚集了啊...
用的什么酶做的PCR,什么模板?
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4楼
2013-12-09 23:36:12
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gyesang
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流
2013-12-10 14:57:19
文飞778899: 金币+3,
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2013-12-11 21:17:27
你做的是multiple PCR,如果想做multiple PCR,在引物设计的时候就要统筹兼顾的,现在既然你已经设计好了,那你就混一起跑个电泳试试呗,建议稀释引物的时候,还是单独稀释比较好,实在常用,可以取少量做mix
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文飞778899
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2013-12-09 18:16:22
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文飞778899
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2楼
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Originally posted by
gyesang
at 2013-12-09 18:16:22
你做的是multiple PCR,如果想做multiple PCR,在引物设计的时候就要统筹兼顾的,现在既然你已经设计好了,那你就混一起跑个电泳试试呗,建议稀释引物的时候,还是单独稀释比较好,实在常用,可以取少量做mix
我是先把各自单引物稀释到100uM,,然后再各取适量所有左右引物混合到一管中,配体系时就直接从单一管中移取。但是现在跑电泳都没条带,会不会是引物都聚集了啊
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3楼
2013-12-09 23:15:08
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文飞778899
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Originally posted by
gyesang
at 2013-12-09 23:36:12
用的什么酶做的PCR,什么模板?...
Takara taq酶,真菌粗提DNA。我今天把100um的引物母液取2ul跑电泳,没有任何条带,难道引物有问题,十月份刚合成的啊
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5楼
2013-12-10 14:25:36
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