| 查看: 1093 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
分子实验遇到了瓶颈 求助！
|
||
| 我是做定点突变的 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有251人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- WB实验问题求助
已经有9人回复
- western blot实验求助
已经有5人回复
- 长链醇钠和氯丙烯反应，碱用什么好？用什么作溶剂？
已经有6人回复
- 原核表达重组表达载体的连问题
已经有14人回复
- 试剂级别的差异
已经有10人回复
- 谁能不能帮帮我，很急，科研遇到瓶颈了
已经有5人回复
- 丙烯酸酯水解及成盐问题
已经有11人回复
- 怎样去除氯盐中的盐酸啊
已经有16人回复
- 酮肼反应成吡唑，做不出来
已经有28人回复
- southern blot实验求助
已经有10人回复
- 急求！羧酸合成酰胺的简单方法，各位大侠帮忙
已经有17人回复
- 如何抑制分子内氢键的产生？
已经有44人回复
- ★谈谈你在实验中遇到的问题 参与有奖★
已经有61人回复
- 【求助】求正交实验分析软件
已经有22人回复
- 【求助/交流】请问有做植物彗星实验的吗？
已经有5人回复
- 【求助】TG实验气体氛围的选择
已经有14人回复
- 【求助】关于苯乙烯的悬浮聚合实验出现的问题、、、我犯了个大错误、、求助，急~~~！
已经有24人回复
- 【求助】均苯四甲酸酐（PMDA）的精制方法（除升华外）
已经有7人回复
- 【求助/交流】外源基因在大肠杆菌中表达的问题？
已经有5人回复
zh10246
铁杆木虫 (文坛精英)
- 应助: 348 (大学生)
- 金币: 13591.3
- 散金: 115
- 红花: 47
- 帖子: 14597
- 在线: 888.3小时
- 虫号: 2786456
- 注册: 2013-11-08
- 专业: 细胞外基质
3楼2013-12-02 18:54:39
|
刚刚做分子实验，有些地方可能操作不当，请大神指教！ 我的载体构建成功了，双酶切的时候载体和目的基因的条带都有，设计引物做定点突变，PCR之后跑胶验证是有很亮的条带的，说明P成功了！ 之后我用DpnI消化酶消化模板，操作是说明书上的：nuclease-free water 32ul/10Xbuffer tango 4ul/DNA 2ul/DpnI 1-4ul不等，之后在37摄氏度消化一个小时，80摄氏度下20min使酶失活，之后把上述50ul消化体系全部加到感受态中冰镇30min,42摄氏度90s热激转化，再在冰上静止5分钟，把转化后的感受态直接加到刷选平板上，过夜之后还是不长菌，求大神给我指导指导！ PS:我怀疑是感受态的原因，但是我的感受态没有做多久，而且做的时候验证了一下是可以用的！ |
2楼2013-12-02 14:36:27
gu03jia
金虫 (初入文坛)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1200.1
- 散金: 46
- 帖子: 42
- 在线: 31.7小时
- 虫号: 1414253
- 注册: 2011-09-23
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
4楼2013-12-03 11:22:03
5楼2013-12-15 21:23:56
30